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一種新的Th2高表達(dá)蛋白—嗜中性顆粒蛋白(NGP)的表達(dá)、純化及其性質(zhì)與功能初探

發(fā)布時(shí)間:2018-04-19 11:52

  本文選題:Th細(xì)胞 + 嗜中性顆粒蛋白。 參考:《華東師范大學(xué)》2006年碩士論文


【摘要】:CD4~+T細(xì)胞根據(jù)其所分泌的細(xì)胞因子的不同,可以分成兩個(gè)亞類:Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞。Th1細(xì)胞主要分泌INF-γ、IL-2、TNF-α和TNF-β,對(duì)于細(xì)胞內(nèi)病原體例如單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)和利什曼原蟲(Leishmania major)的清除十分重要;而Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-13、IL-5、IL-6、IL-10和IL-9,從而誘導(dǎo)體液反應(yīng)去清除腸內(nèi)蠕蟲和線蟲等寄生蟲。體內(nèi)Th1和Th2的平衡在維護(hù)機(jī)體免疫狀態(tài)平衡、調(diào)節(jié)生理機(jī)能、防御感染、監(jiān)視腫瘤等多方面具有重要的意義。若朝向Th1分化的細(xì)胞過(guò)量,將導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生;反之,若Th2過(guò)于活躍,則會(huì)導(dǎo)致過(guò)敏和哮喘的發(fā)生。 盡管近幾年人們對(duì)輔助性T細(xì)胞分化的認(rèn)識(shí)有了很大的提高,但仍然存在一些問(wèn)題。我們實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用高通量基因芯片技術(shù)對(duì)Th1和Th2的基因表達(dá)譜進(jìn)行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)了一種新的Th2高表達(dá)基因——嗜中性顆粒蛋白(NGP)基因;并且通過(guò)RT—PCR、實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)一步確認(rèn)NGP的確在Th2細(xì)胞中的高表達(dá)。由此推斷NGP可能在輔助性T細(xì)胞的分化中發(fā)揮某種功能。將NGP克隆入質(zhì)粒pEGFP-N1后,利用激光共聚焦熒光顯微鏡技術(shù),發(fā)現(xiàn)融合表達(dá)的NGP—GFP定位于細(xì)胞質(zhì)中,并且轉(zhuǎn)染了NGP-pEGFP-N1的293T細(xì)胞的上清液可以抑制OVA誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞的增殖。為了進(jìn)一步對(duì)NGP進(jìn)行功能研究,表達(dá)純化了NGP-GST融合蛋白,同時(shí)制備了抗體。經(jīng)過(guò)westernblot驗(yàn)證,,在蛋白水平上也證實(shí)NGP是在Th2中高表達(dá)。由此,可以初步斷定NGP為Th2分泌的一種新的細(xì)胞因子。進(jìn)一步對(duì)純化的NGP-GST蛋白進(jìn)行功能研究表明,所純化的融合蛋白同樣可以抑制OVA誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖。 綜上所述,本研究可能發(fā)現(xiàn)了Th2分泌的一種新的細(xì)胞因子。這種細(xì)胞因子具有抑制特異性抗原所引起的脾細(xì)胞增殖的功能。
[Abstract]:Th1 cells secrete INF - 緯 , IL - 2 , TNF - 偽 and TNF - 尾 , which are very important for the removal of intracellular pathogens such as monocytes and Leishmania major .
Th2 cells mainly secrete IL - 4 , IL - 13 , IL - 5 , IL - 6 , IL - 10 and IL - 9 , thus inducing humoral response to remove parasites such as intestinal worms and nematodes . The balance of Th1 and Th2 in vivo has important significance in maintaining the balance of immune status , regulating physiological function , preventing infection , and monitoring tumor .
Conversely , if Th2 is too active , allergic reactions and asthma occur .

Although there has been a great improvement in the understanding of helper T cell differentiation in recent years , there are still some problems . Our laboratory uses high - throughput gene chip technology to study the gene expression profiles of Th1 and Th2 .
In order to further study the function of NGP , it was found that NGP - GFP could play a role in the differentiation of helper T cells .

In conclusion , the present study may find a novel cytokine secreted by Th2 , which has the function of inhibiting the proliferation of splenic cells caused by specific antigens .

【學(xué)位授予單位】:華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2006
【分類號(hào)】:R392;Q78

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本文編號(hào):1772989


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