本文選題：間充質(zhì)干細胞 + 心肌細胞��； 參考：《大連醫(yī)科大學(xué)》2005年碩士論文

【摘要】：目的:心臟疾病的發(fā)病率和死亡率在各類疾病中始終處于重要地位,嚴重威脅人類生存和生活質(zhì)量。由于成熟的心肌細胞受損后再生能力十分有限,因此,如何對受損心肌進行有效的修復(fù)治療一直是醫(yī)學(xué)界面臨的最大難題之一。心肌重塑(cardiomyoplasty)是最近發(fā)展的治療缺血性心臟病的一個新途徑,即用細胞移植或組織工程的方法,將種子細胞直接移植或在體外培養(yǎng)成心肌組織后移植到受損的心肌中,用以修復(fù)受損心肌組織。 以往的研究中,種子細胞的來源主要是新生大鼠心室肌細胞,但是,就臨床應(yīng)用而言,心肌細胞的來源極為有限,并且來源于異種的心肌細胞在移植過程中也不可避免地要受到免疫排斥反應(yīng)的影響,因此,尋求其它來源的種子細胞也就成了目前亟待解決的問題。骨髓間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cells, MSCs),已經(jīng)被證實在一定的條件下可以轉(zhuǎn)化為心肌細胞,并且因其具有取材容易、體外擴增能力強等優(yōu)點,近年來受到了廣泛的關(guān)注。本研究采用組織工程三維構(gòu)建方法,將成人骨髓來源骨髓間充質(zhì)干細胞(hMSCs)與新生大鼠心肌細胞在體外三維條件下共培養(yǎng),探討心肌細胞形成的心肌微環(huán)境對于人骨髓間充質(zhì)干細胞向具有心肌細胞表型的細胞分化的影響。 ·2· 材料與方法: 1.經(jīng)過反復(fù)實踐,摸索出相對簡便有效、實用的人骨髓間充質(zhì)干 細胞體外收集、分離、擴增培養(yǎng)技術(shù) 2.新生大鼠心肌細胞的原代分離培養(yǎng):經(jīng)過反復(fù)實踐,摸索出相 對簡便有效、實用的新生大鼠原代心肌細胞體外收集、分離、培養(yǎng)技 術(shù),得到純度和存活率都相對較高的原代心肌細胞。 3.采用組織工程三維構(gòu)建方法,將成人骨髓來源骨髓間充質(zhì)干細 胞(hMSCs)與新生大鼠心肌細胞在體外三維條件下共培養(yǎng),探討心肌細 胞形成的心肌微環(huán)境對于人骨髓間充質(zhì)干細胞向具有心肌細胞表型的 細胞分化的影響。 將分離并培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞與 DIPI 標(biāo)記的 hMSCs 以及液態(tài)Ⅰ型膠原混合,在環(huán)形槽中鑄成環(huán)狀細胞/膠原條帶。構(gòu) 建的條帶在環(huán)形槽中培養(yǎng) 14d后取出通過光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡、 免疫組織化學(xué)染色和激光共聚焦顯微鏡觀察,對其中 DAPI 標(biāo)記的 hMSCs 進行表型分析。 結(jié)果:骨髓液密度梯度離心得到人骨髓間充質(zhì)干細胞,所得細胞 經(jīng)流式細胞儀檢測細胞表面抗原 CD34(-), CD45(-), CD29(+), CD44(+), HLA-DR(-),細胞純度達到 99%以上。說明 hMSCs 的抗原表型 不是單一的,具有間質(zhì)細胞、上皮細胞等細胞的特征,但不表達造血 干/祖細胞的標(biāo)志如 CD34 和 CD45,因此證明我們所分離細胞是不同于 造血干細胞的一類細胞群。 組織學(xué)和免疫組織化學(xué)染色研究結(jié)果顯示,在組織工程化三維構(gòu) 建物中,DAPI 標(biāo)記的 hMSCs 分布廣泛,呈橢圓形,似心肌細胞核,其排列 方向與構(gòu)建條帶長軸排列方向一致。免疫組化檢測標(biāo)記的胞漿心肌特 異蛋白肌鈣蛋白 T 染色陽性。激光共聚焦顯微鏡觀察顯示,條帶中標(biāo)記 的藍染核 hMSCs 中具有類似周圍心肌細胞的肌動蛋白和輔肌動蛋白的 陽性表達;細胞的連接蛋白 Connexin43 也呈陽性表達。 結(jié)論:hMSCs 在組織工程化心肌微環(huán)境的作用下可以向具有心肌細 胞表型的細胞分化,并且可以和周圍的細胞建立細胞連接。hMSCs 可以 成為組織工程化心肌的另一種新型的種子細胞來源。在心肌細胞來源 極為有限的情況下,我們可以考慮利用患者自身的 hMSCs 來部分、甚
[Abstract]:Objective: the incidence and mortality of heart disease always plays an important role in various diseases, serious threat to human survival and quality of life. Because of the maturity of the myocardial cell damage after regeneration ability is very limited, therefore, how to effectively repair the damaged myocardium has been one of the biggest problems facing the medical profession. Myocardial remodeling (cardiomyoplasty) is a new way for the treatment of ischemic heart disease in recent development. The method is used for cell transplantation or tissue engineering, seed cells transplanted directly or in vitro into myocardial tissue after transplantation into the damaged myocardium, to repair the damaged myocardium. In the previous study, the source of seed cells is the main cell ventricular myocytes of neonatal rats, however, clinical application, source of myocardial cells is extremely limited, and the origin of heterogeneous myocardial cells in transplantation process can not be To avoid to be affected, so the immune rejection, seed cells seeking other sources have become an urgent problem to be solved. Bone marrow mesenchymal stem cells (Mesenchymal stem, cells, MSCs) have been identified in certain conditions can be transformed into myocardial cells, and because of its easy. The advantages of in vitro amplification ability, has received widespread attention in recent years. This research adopts three-dimensional tissue engineering construction method, the source of adult bone marrow mesenchymal stem cells (hMSCs) and myocardial cells of neonatal rats were cultured in vitro in three-dimensional conditions, to investigate the myocardial cell formation of myocardial micro environment for human bone marrow mesenchymal stem cells cell differentiation with myocardial cell phenotype.
2
Materials and methods:
1. after repeated practice, a relatively simple, effective and practical human bone marrow mesenchymal stem was found.
In vitro collection, separation and amplification of cells in vitro
2. primary isolation and culture of neonatal rat cardiac myocytes: through repeated practice, fumble the phase
In vitro collection, separation and culture of a simple, effective and practical neonatal rat primary cardiomyocyte in vitro
Primary cardiomyocytes with relatively high purity and survival rate were obtained.
3. using a three-dimensional tissue engineering method, the bone marrow mesenchymal stem cells of adult bone marrow are dry and fine
Cell (hMSCs) and neonatal rat cardiomyocytes were co cultured in vitro in vitro to explore myocardial fine
The microenvironment formed by the cell to the phenotype of human marrow mesenchymal stem cells to the cardiomyocytes
The effect of cell differentiation. The isolated and cultured neonatal rat cardiomyocytes are labeled with DIPI
The mixture of hMSCs and liquid type I collagen is cast into a ring cell / collagen band in a ring groove.
The constructed strip is taken in a circular slot to be cultured for 14d and removed through an optical microscope, a fluorescence microscope,
Immunohistochemical staining and laser confocal microscopy were used to observe the DAPI markers.
HMSCs was used for phenotypic analysis.
Results: bone marrow mesenchymal stem cells were obtained from bone marrow liquid density gradient centrifugation, and the obtained cells were obtained.
Cell surface antigen CD34 (-), CD45 (-), CD29 (+) were detected by flow cytometry.
CD44 (+), HLA-DR (-), the cell purity of more than 99%. Indicating the antigen phenotype of hMSCs
Not single, having the characteristics of cells, such as interstitial cells, epithelial cells, but not expressing hematopoiesis
The markers of stem / progenitor cells, such as CD34 and CD45, prove that the cells we separate are different
A group of cell groups of hematopoietic stem cells.
Histological and immunohistochemical staining results show that the three-dimensional structure of tissue engineering
In the construction, the DAPI labeled hMSCs is widely distributed, oval, like the nucleus of the heart of the myocardium.
The direction is consistent with the orientation of the long axis of the constructed strip. The cytoplasm myocardium of the immunohistochemical detection marker
The isoprotein troponin T staining was positive. The laser confocal microscopy showed that the bands were marked in the strip.
The blue nuclear hMSCs with similar surrounding myocardial cell actin and the actin filament
Positive expression was expressed, and the connexin Connexin43 of the cell was also positive.
Conclusion: hMSCs can have fine myocardium under the action of tissue engineered myocardial microenvironment.
Cell phenotype cells differentiate and can establish cell connection.HMSCs with the surrounding cells.
Another new seed cell source of tissue engineered myocardium. In the source of cardiac myocytes
In a very limited case, we can consider the use of the patient's own hMSCs part, very much.

【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R329.2

【共引文獻】

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本文編號：1750901