本文選題：坍塌反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白-1　切入點(diǎn)：真核表達(dá)載體　出處：《暨南大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 目的：構(gòu)建CRMP-1-phrGFPⅡ-N真核表達(dá)載體，探討坍塌反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白-1(Collapsin Response Mediator Protein-1，CRMP-1)過表達(dá)情況下對(duì)細(xì)胞突起生長(zhǎng)的影響。 材料與方法：取新生6d SD大鼠腦海馬組織，提取總RNA，用RT-PCR的方法擴(kuò)增目的基因cDNA，將其克隆到PGEM-T Easy載體上，經(jīng)測(cè)序正確后再亞克隆到phrGFPⅡ-N真核表達(dá)載體，大量提取質(zhì)粒。用NGF誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，脂質(zhì)體法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染CRMP-1-phrGFPⅡ-N真核表達(dá)載體，通過綠色熒光蛋白示蹤的方法對(duì)其表達(dá)部位進(jìn)行亞細(xì)胞定位，并觀察PC12細(xì)胞的表型變化。 結(jié)果：1)成功擴(kuò)增CRMP-1基因cDNA，構(gòu)建了CRMP-1-phrGFPⅡ-N真核表達(dá)載體，經(jīng)測(cè)序與genebank的序列同源性為99.8％。2)未經(jīng)NGF誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞有3～5個(gè)突起，突起短小、分支少，增殖迅速。經(jīng)NGF誘導(dǎo)后的PC12細(xì)胞突起明顯變長(zhǎng)，分支增多，增殖緩慢。3)脂質(zhì)體法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后，空載體轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞顯示較強(qiáng)的綠色熒光，胞體和突起內(nèi)均有熒光分布，胞體和突起末端的熒光較中段突起內(nèi)強(qiáng)，，細(xì)胞突起和分支與空白對(duì)照組細(xì)胞無明差異。CRMP-1-phrGFPⅡ-N轉(zhuǎn)染組，其熒光較空載體組弱，但其分布與空載體轉(zhuǎn)染組相似。該組細(xì)胞突起明顯短小，僅有個(gè)別陽性細(xì)胞具有超過胞體直徑數(shù)倍的突起，但仍較空載體組短小。突起再分支級(jí)數(shù)少，僅1～2級(jí)分支。 結(jié)論：1)成功構(gòu)建了CRMP-1-phrGFPⅡ-N真核表達(dá)載體。2)CRMP-1表達(dá)于PC12細(xì)胞的胞體和突起。3)CRMP-1過表達(dá)時(shí)細(xì)胞突起短小且再分支級(jí)數(shù)少，表明CRMP-1可能具有抑制突起生長(zhǎng)和分支的作用。
[Abstract]:Aim: to construct CRMP-1-phrGFP 鈪

本文編號(hào)：1721247