本文選題：細胞凋亡　切入點：U-251　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學》2007年碩士論文

【摘要】： 前言鉛是最古老的毒物之一。在現今生活中，由于鉛的廣泛應用使得鉛的污染也廣泛存在，雖然我們采取了一些措施來減少鉛的影響，但是鉛仍然對人體健康造成了很大傷害。鉛具有很強的神經毒性，主要表現為鉛對未成熟個體學習記憶的損害，使未成年人發(fā)生學習記憶功能障礙。鉛對神經系統(tǒng)的毒性作用和低濃度鉛引發(fā)的神經元凋亡有關。神經細胞過度凋亡，，則必然會對中樞神經系統(tǒng)的正常發(fā)育和分化造成嚴重的影響。在體的動物研究已經有結果證明這一現象的存在。我們建立了細胞模型來進一步研究這一作用的分子以及基因機制。我們選用了以前研究中不常見的人神經膠質瘤細胞U-251細胞作為研究對象。 目的建立鉛染毒導致U-251細胞凋亡的模型。觀察U-251細胞在鉛染毒情況下的變化，并確認其發(fā)生了細胞凋亡。研究其在凋亡的過程凋亡相關基因的改變。 方法MTT；DNALADDER；細胞熒光染色；基因芯片。 結果 1．U-251細胞的生長曲線。細胞在37℃，5％CO2和飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，接種后每二十四小時進行細胞計數，獲得細胞的生長曲線。從曲線可知，U-251細胞的倍增時間約為24小時，第1d細胞處于停滯期：第2—6d細胞處于對數生長期；第7—8d細胞處于平臺期，此時的細胞由于數量太多，互相接觸，導致接觸抑制，生長速度變慢，開始死亡，數量有所減少。 2．使用MTT法測定醋酸鉛作用于U-251細胞的時間濃度曲線，并使用SPSS軟件對實驗結果進行方差檢驗。試驗的結果說明，醋酸鉛能夠明顯抑制細胞的生長，這種抑制作用與醋酸鉛的作用時間和作用劑量都呈正相關的關系。其IC50在0.2mmol／L附近。隨著作用時間的增加，各作用劑量組之間的差異也更加明顯。 3．U-251細胞凋亡的確定以及醋酸鉛作用時間和濃度的確定。在醋酸鉛的作用下，U251細胞確實發(fā)生了細胞凋亡，這種導致凋亡的作用隨著作用劑量和作用時間的增加而增強。綜合MTT的結果和本部分對細胞凋亡的檢測試驗結果，確定下一步試驗的作用條件為醋酸鉛濃度為0.5mmol／L，作用時間為72小時。 4．U-251細胞凋亡的基因芯片分析�；蛐酒慕Y果顯示在醋酸鉛的作用下有CCND1，PARP1表達下調；TNFRSF10B，GADD45A，PSEN2，HSPA5，Bax，p21表達上調。 結論 醋酸鉛通過多種基因通路促使細胞發(fā)生凋亡并影響學習記憶的功能。
[Abstract]:Lead is one of the oldest poisons.In modern life, lead pollution is also widespread due to the widespread use of lead. Although we have taken some measures to reduce the impact of lead, lead still causes great harm to human health.Lead has strong neurotoxicity, mainly because of the damage of lead to learning and memory of immature individuals, which makes minors have learning and memory dysfunction.The toxicity of lead to the nervous system is related to the apoptosis of neurons induced by low concentration of lead.Excessive neuronal apoptosis will inevitably have a serious impact on the normal development and differentiation of the central nervous system.Animal studies in vivo have shown the existence of this phenomenon.We have established cell models to further study the molecular and genetic mechanisms of this action.We selected human glioma cell U-251 cells, which were not common in previous studies.Objective to establish a model of U-251 cell apoptosis induced by lead exposure.The changes of U-251 cells under lead exposure were observed and apoptosis was confirmed.To study the changes of apoptosis-related genes in the process of apoptosis.Methods MTT DNA LADDER; cell fluorescence staining; gene chip.ResultThe growth curve of 1.U-251 cells.The cells were cultured in a incubator of 37 鈩

本文編號：1717754