本文選題：脊髓灰質(zhì)炎病毒　切入點：疫苗　出處：《中國生物制品學雜志》2014年12期

【摘要】：目的建立檢測脊髓灰質(zhì)炎病毒突變比例的熒光定量PCR方法,并進行驗證及初步應用。方法分別建立檢測Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰質(zhì)炎病毒突變株和非突變株的熒光定量PCR方法,并進行特異性、重復性和靈敏度驗證。通過Ct值計算樣品的突變比例(revertant proportion,RP),并進行準確性和重復性驗證。采用建立的熒光定量PCR方法檢測脊髓灰質(zhì)炎病毒減毒株的突變比例。結果建立的檢測Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰質(zhì)炎病毒突變株和非突變株的熒光定量PCR方法能夠特異性擴增相應基因片段;重復性試驗Ct值的變異系數(shù)(CV)為0.085%~5.564%;靈敏度為1×10-7~1×10-6ng,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型非突變熒光定量PCR可分別檢測到含量約0.084 3、0.029 2和0.266 7 CCID50的病毒。熒光定量PCR測定RP的方法經(jīng)驗證發(fā)現(xiàn),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型混合質(zhì)粒對照的RP檢測值與理論值的差異較小,分別為0.040 9±0.037 4、0.008 8±0.034 3和-0.029 6±0.026 8。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰質(zhì)炎減毒株的RP分別為0.001 0、0.002 0和0.001 7。結論熒光定量PCR分析脊髓灰質(zhì)炎病毒突變比例的方法,特異性、重復性及準確性均較好,并具有較高的靈敏度,可用于實驗室內(nèi)部對脊髓灰質(zhì)炎病毒的突變比例測定,并可能成為脊髓灰質(zhì)炎病毒體內(nèi)或體外神經(jīng)毒力評價的替代方法。
[Abstract]:Objective to establish a fluorescence quantitative PCR method for the detection of poliovirus mutation.Methods fluorescence quantitative PCR method was established to detect the mutants and non-mutants of poliovirus type 鈪，

本文編號：1715947