本文選題：日本血吸蟲　切入點(diǎn)：聚合酶鏈反應(yīng)　出處：《國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》2014年23期

【摘要】：目的構(gòu)建日本血吸蟲(Sj)重組質(zhì)粒pGEX-Sj32并研究其在大腸埃希菌BL21中的表達(dá)效率。方法從該實(shí)驗(yàn)室保存的BL21(pET28α-Sj32)重組菌中抽提質(zhì)粒pET28α-Sj32,PCR擴(kuò)增Sj32抗原編碼基因,定向克隆入穿梭載體pGEX-1λT,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-Sj32。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),經(jīng)異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá);表達(dá)產(chǎn)物用SDS-PAGE和Western blot進(jìn)行鑒定。結(jié)果 PCR成功擴(kuò)增出Sj32編碼基因,并成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pGEX-Sj32;SDS-PAGE顯示相對分子質(zhì)量約為58×103的重組蛋白,薄層掃描分析顯示表達(dá)蛋白約占菌體總蛋白的21%;Western blot顯示重組蛋白可被日本血吸蟲感染兔血清識別。結(jié)論成功構(gòu)建日本血吸蟲重組質(zhì)粒pGEX-Sj32,該重組質(zhì)粒在大腸埃希菌BL21中得到了高效表達(dá),且表達(dá)蛋白具有特異的抗原性。
[Abstract]:Objective to construct the recombinant plasmid pGEX-Sj32 of Schistosoma japonicum and study its expression efficiency in Escherichia coli BL21.Methods the Sj32 antigen coding gene was amplified from the recombinant strain BL21(pET28 偽 -Sj32 (pET28 偽 -Sj32) and cloned into the shuttle vector pGEX-1 位 T to construct the recombinant plasmid pGEX-Sj32.The recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21DDE3 and was induced by isopropylthiothio- 尾 -Dgalactoside (IPTG), and the expression product was identified by SDS-PAGE and Western blot.Results the Sj32 encoding gene was successfully amplified by PCR, and the recombinant plasmid pGEX-Sj32 SDS-PAGE showed that the relative molecular weight of the recombinant protein was about 58 脳 10 ~ 3.TLC scanning showed that the expressed protein accounted for about 21% of the total bacterial protein. Western blot showed that the recombinant protein could be recognized by the sera of rabbits infected with Schistosoma japonicum.Conclusion the recombinant plasmid pGEX-Sj32 of Schistosoma japonicum was successfully constructed. The recombinant plasmid was highly expressed in Escherichia coli BL21 and the expressed protein had specific antigenicity.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院傳染病寄生蟲病研究所;
【基金】：重慶市科委地方病重大專項(xiàng)基金(2008AB5055、2008AB5008、2008AB5054)
【分類號】：R378

【共引文獻(xiàn)】

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5 吳，

本文編號：1710974