本文選題：載脂蛋白CⅡ　切入點(diǎn)：克隆　出處：《吉林大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 載脂蛋白(Apolipoprotein,Apo)是血漿中一組水溶性的低分子量蛋白質(zhì),是組成脂蛋白的蛋白質(zhì)。載脂蛋白CⅡ(Apolipoprotein CⅡ, ApoCⅡ)作為脂蛋白脂酶(lipoprteinlipase,LPL)的輔助因子,是參與脂類代謝最重要的ApoC族的一個(gè)亞型,可激活多種來(lái)源的LPL,抑制肝臟對(duì)乳糜微粒(chylomicron lipoprotein, CM)和極低密度脂蛋白(very low density lipoprotein, VLDL)的攝取,維持脂蛋白(lipoprotein, LP)的穩(wěn)定性,并參與血漿中LP殘粒的清除過(guò)程,保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞,在富含甘油三酯(triglyceride, TG)的LP分解代謝中具有重要的生物學(xué)功能,并在阻止高甘油三酯血癥、動(dòng)脈粥樣硬化的形成方面發(fā)揮重要作用。本研究從人肝組織總RNA中釣取ApoCⅡcDNA序列,利用基因重組技術(shù)構(gòu)建人ApoCⅡ克隆載體pMD18-T-ApoCⅡ及ApoCⅡ表達(dá)載體pPICZα-ApoCⅡ。將ApoCⅡ表達(dá)載體轉(zhuǎn)化X-33畢赤酵母,建立兼具原核系統(tǒng)良好操作性和真核系統(tǒng)后加工性的重組ApoCⅡ畢赤酵母真核表達(dá)體系。通過(guò)PCR鑒定和重組ApoCⅡ蛋白SDS-PAGE分析篩選出高表達(dá)重組ApoCⅡ的酵母菌株。結(jié)果表明,本研究正確克隆了人ApoCⅡcDNA序列,構(gòu)建的重組ApoCⅡ畢赤酵母真核表達(dá)體系經(jīng)甲醇誘導(dǎo)可分泌重組ApoCⅡ蛋白,相對(duì)分子量為10kDa;重組的表達(dá)具有累積效應(yīng),產(chǎn)量在一段時(shí)間內(nèi)隨表達(dá)時(shí)間延長(zhǎng)而增加;重組ApoCⅡ在畢赤酵母X-33中表達(dá)的最佳pH值為5.2左右。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究為基因工程方法生產(chǎn)ApoCⅡ提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:Apolipoprotein C 鈪，

本文編號(hào)：1700760