本文選題：大鼠腎小管上皮細胞　切入點：腎小管上皮轉分化　出處：《浙江醫(yī)學》2014年17期

【摘要】：目的觀察miRNA在大鼠腎小管上皮細胞(NRK-52E)發(fā)生上皮-肌成纖維細胞轉分化(EMT)過程中的變化,篩選與腎小管上皮細胞轉分化相關的miRNA。方法體外培養(yǎng)NRK-52E,用5 ng/ml轉化生長因子-13 1(TGF-13 1)分別作用0、3、6、12、24、48 h,以0 h為空白組(BC組),余為TGF-β1組。倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化;real-time PCR法檢測細胞內α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、E鈣蛋白(E-cad)、1型膠原(Col 1)和纖連蛋白(FN)的mRNA表達水平;Western blot法檢測細胞內α-SMA的表達水平;ELISA法檢測上清液中FN的含量;莖環(huán)實時熒光定量PCR法檢測6條miRNA在細胞內的表達水平。結果與BC組比較,TGF-β1組部分細胞失去原有的鵝卵石形態(tài),轉變成成纖維細胞特有的梭形;細胞內α-SMA、Col I和FN的mRNA表達上調,E-cad的mRNA表達下調,細胞內α-SMA表達量增多,細胞上清液中FN含量升高(均P0.05);miR-30d、miR-132和miR-21的表達上調,miR-200b、miR-192和miR-10b的表達下調(均P0.05)。結論 TGF-β1可誘導NRK-52E發(fā)生EMT。miR-30d、miR-132、miR-21、miR-200b、miR-192和miR-10b可能參與大鼠腎小管上皮細胞EMT,值得進一步研究。
[Abstract]:Objective to observe the changes of miRNA in the process of epithelial-myofibroblast transdifferentiation in rat renal tubular epithelial cell line NRK-52. Methods NRK-52E was cultured in vitro and treated with 5 ng/ml transforming growth factor (TGF- 13 1(TGF-13 1) for 48 h, respectively. The cells were treated with 0 h as blank group and TGF- 尾 1 as control group. The morphology of cells was observed by inverted phase contrast microscope. The expression of 偽 -SMA in the supernatant was detected by real-time PCR assay. The expression of 偽 -SMA in the supernatant was detected by Elisa and the expression level of 偽 -SMA in the supernatant was detected by Elisa. The expression level of 偽 -SMA in the supernatant was determined by Elisa. The expression level of 偽 -SMA in the supernatant was determined by Elisa method and the expression level of 偽 -SMA in the supernatant was determined by Elisa. The expression level of 偽 -SMA in the supernatant was determined by Elisa. Results compared with BC group, some cells of TGF- 尾 1 group lost their cobblestone morphology and transformed into fusiform of fibroblast. The expression of 偽 -SMA-Col I and FN mRNA up-regulated the expression of E-cad mRNA and increased the expression of 偽 -SMA in cells. The content of FN in supernatant was increased (both P0.05 miR-30dnmiR-132 and miR-21 up-regulated the expression of miR-200bnmiR-192 and miR-10b (both P0.05A). Conclusion TGF- 尾 1 can induce NRK-52E to produce EMT.miR-132miR-132miR-2miR-200bmiR-192 and miR-10b may be involved in EMTs of rat renal tubular epithelial cells.
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院腎內科;溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院心血管內科;溫州醫(yī)科大學微生物免疫學教研室;
【基金】：溫州市科技計劃項目(Y20080116) 浙江省自然科學基金資助項目(Y12H050017) 浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計劃項目(No.2010KYA135)
【分類號】：R363

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：1685917