本文選題：人蛋白酶激活受體3　切入點：單克隆抗體　出處：《汕頭大學》2007年碩士論文

【摘要】： 背景與目的：蛋白酶激活受體3(protease-activated receptor-3，PAR3)屬于G蛋白偶聯(lián)受體(G protein-coupled receptor，GPCR)家族成員，由細胞外區(qū)(N—末端和細胞外袢)、跨膜區(qū)(7個跨膜螺旋)及細胞內(nèi)區(qū)(細胞內(nèi)袢和C—末端)組成。PAR3存在于單核細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞等，廣泛分布在心臟，肝臟，胰腺，胸腺，小腸，胃，淋巴結，氣管，腎上腺和骨髓等各種組織，參與炎癥、腫瘤等疾病。制備hPAR3抗體，有利于檢測PAR3的表達，，深入了解其在疾病中的作用。鑒于我國國情，研制效價高，特異性好的PAR3單克隆抗體(mAb)，具有重要意義。 方法：以hPAR3為免疫原免疫BALB／c小鼠，取免疫小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤NS-1細胞融合。通過間接ELISA法篩選可特異性分泌抗hPAR3 mAb的雜交瘤細胞。采用Ig類與亞類鑒定試劑盒鑒定mAb的Ig亞類；通過ELISA、免疫組織化學染色、流式細胞分析、激光共聚焦掃描顯微鏡、Dot blot等技術鑒定mAb的特異性。 結果：獲得2株可穩(wěn)定分泌抗hPAR3 mAb的雜交瘤細胞，其分泌的mAb均為IgM。免疫組化染色表明，mAb與肺中的巨噬細胞，結腸中的淋巴及疑似肥大細胞，扁桃體和包皮組織的淋巴細胞呈陽性反應。流式細胞儀分析及激光共聚焦掃描顯微鏡觀察顯示，2株mAb與人肺腺癌細胞系A549細胞上的PAR3呈陽性反應。Dot blot分析表明，其mAb能與轉印至NC膜上的PAR3Ag有效結合。 結論：成功地制備抗hPAR3 mAb，為研究PAR3的表達，作用及其相關工作提供了有用的試劑。
[Abstract]:Background & AIM: protease activated receptor 3(protease-activated receptor-3 (PAR3) is a member of G protein coupled receptor G protein-coupled receptor (GPCR3) family. PAR3 is composed of N- terminal and extracellular loop, transmembrane region (7 transmembrane spirals) and intracellular region (intracellular loop and C- terminal). PAR3 exists in monocytes, macrophages, dendritic cells and so on, and is widely distributed in heart, liver, pancreas, etc. Thymus, small intestine, stomach, lymph node, trachea, adrenal gland and bone marrow participate in inflammation, tumor and other diseases. The preparation of hPAR3 antibody is helpful to detect the expression of PAR3 and to understand its role in the disease. It is of great significance to develop PAR3 monoclonal antibody with high titer and good specificity. Methods: BALB/c mice were immunized with hPAR3. The hybridoma cells secreting specific anti-#en2# mAb were screened by indirect ELISA method. The IgG subclasses of mAb were identified by Ig and subclass identification kit, and the Ig subclasses of mAb were identified by immunohistochemical staining. The specificity of mAb was identified by flow cytometry, laser confocal scanning microscope (LSCM) and dot blot. Results: two hybridoma cells secreting hPAR3 mAb stably were obtained. The mAb secreted by them were all IgM.Immunohistochemical staining showed that mAb was associated with macrophages in lung, lymph nodes and suspected mast cells in colon. The positive reaction of lymphocytes in tonsils and prepuce tissues was observed by flow cytometry and confocal laser scanning microscopy. The positive reaction between mAb and PAR3 in human lung adenocarcinoma cell line A549 was observed by flow cytometry and laser confocal scanning microscopy. Its mAb can be effectively combined with PAR3Ag transferred to NC film. Conclusion: the successful preparation of anti hPAR3 mAbprovides a useful reagent for studying the expression, effect and related work of PAR3.
【學位授予單位】：汕頭大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R392

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本文編號：1682435