本文選題：枯否細(xì)胞　切入點(diǎn)：STAT　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】： 目的:探討抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)對(duì)脂多糖介導(dǎo)的急性肝損傷發(fā)生過(guò)程中肝臟和枯否細(xì)胞MAPK和STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。 方法:實(shí)驗(yàn)1.雄性昆明種小鼠54只隨機(jī)分為3組:(1)對(duì)照組(n=6):腹腔注射0.9 % NaCl 0.2 ml;(2)Galn /LPS組(n=24):(Galn 520 mg + LPS 120μg)/kg,i.p.;(3)NAC+ Galn /LPS組(n=24):NAC 150 mg/kg,連續(xù)灌胃3天;第3天灌胃后1h腹腔注射GalN/LPS,劑量、分組和處理與Galn /LPS組相同。以上各組動(dòng)物分別于注射Galn /LPS或生理鹽水后0.5h、1h、2h和6h后,在戊巴比妥鈉麻醉下經(jīng)眼內(nèi)眥采血和開(kāi)腹取肝,用于血漿ALT、肝MDA和GSH含量測(cè)定及肝臟病理組織學(xué)檢查。實(shí)驗(yàn)2.動(dòng)物和分組同實(shí)驗(yàn)1。(1)對(duì)照組(n=6):0.9 % NaCl 0.2 ml,i.p.;(2)LPS組(n=24):LPS 5 mg/kg,i.p.;(3)NAC+LPS組(n=24):NAC 150mg/kg,連續(xù)灌胃3天,第3天灌胃后1h,腹腔注射LPS 5 mg/kg,i.p.。分別于注射LPS或生理鹽水后0.5h、1h、2h和6h后,在戊巴比妥鈉麻醉下開(kāi)腹取肝臟,用Western blotting方法檢測(cè)肝臟MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK、STAT1、STAT3和HSP 70表達(dá),用放免法測(cè)定肝TNF-α含量。實(shí)驗(yàn)3.雄性昆明種小鼠40只分為3組,無(wú)菌分離枯否細(xì)胞(kupffer cells, KCs),培養(yǎng)24h后,分為:(1)對(duì)照組(n=8):直接收集KCs和培養(yǎng)基上清液;(2)LPS組(n=16):DMEM培養(yǎng)基中加入100 ng/ml LPS剌激0.5h或1h,收集KCs和培養(yǎng)基上清液;(3)NAC+LPS組(n=16):用含NAC(10 mmol/L)的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)2h后,再加入含LPS(100 ng/ml)的DMEM基培養(yǎng)刺激0.5h或1h,收集KCs和培養(yǎng)基上清液。KCs MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK、STAT1、STAT3和HSP70表達(dá)及培養(yǎng)上清液中TNF-α含量檢測(cè)同實(shí)驗(yàn)二。 結(jié)果:NAC預(yù)處理可明顯減輕GalN/LPS所致急性肝損傷,經(jīng)NAC預(yù)處理動(dòng)物血漿ALT活性和肝臟MDA含量明顯下降,而GSH含量則升高。LPS剌激可使肝臟和枯否細(xì)胞的MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK的磷酸化表達(dá)顯著增強(qiáng),p-MEK1/2、p-ERK1/2在LPS剌激0.5h達(dá)到高峰,2h后恢復(fù)至基礎(chǔ)水平,而p38MAPK則在LPS刺激0.5h后持續(xù)保持高磷酸化水平。肝勻漿和KCs培養(yǎng)基的TNF-α水平亦明顯增高。STAT1和STAT3在LPS剌激0.5h后發(fā)生磷酸化,1h時(shí)達(dá)高峰并持續(xù)保持較高的磷酸化水平。NAC預(yù)處理可顯著抑制LPS所致肝臟或KCs MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK、STAT1和STAT3的磷酸化,與此同時(shí),伴有肝臟或KCs培養(yǎng)基上清中TNF-α水平顯著降低。HSP 70在LPS剌激0.5h時(shí)表達(dá)明顯高于對(duì)照組,1h后逐漸趨于正常水平。 結(jié)論:LPS介導(dǎo)KCs激活產(chǎn)生的ROS,在激活MAPK和STAT的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起了重要作用,并導(dǎo)致TNF-α的釋放增加。NAC通過(guò)其抗氧化應(yīng)激作用可部分抑制LPS介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),使TNF-α釋放減少,從而發(fā)揮其抗損傷作用。在LPS作用下HSP 70的表達(dá)增強(qiáng)可能是機(jī)體拮抗LPS誘導(dǎo)肝損傷發(fā)生的重要自我保護(hù)機(jī)制。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of antioxidant N-acetylcysteine (NAC-) on MAPK and STAT signal transduction in liver and Kupffer cells during lipopolysaccharide mediated acute liver injury. Methods: experiment 1. Fifty-four male Kunming mice were randomly divided into 3 groups: control group (n = 6): intraperitoneal injection of 0.9% NaCl 0.2 ml / L ~ (2 +) Gal ~ (2 +) LPS group (n ~ (24): n ~ (24): n ~ (20) mg / LPS ~ (120) 渭 g 路kg ~ (-1) 路kg ~ (-1) 路kg ~ (-1) 路kg ~ (-1) NaCl Galn / LPS group, n = 40% NAC 150 mg 路kg ~ (-1) 路kg ~ (-1)) intraperitoneal injection of Galnr-LPS at 1 hour after intragastric administration for 3 days. The animals were divided into groups and treated in the same way as those in the Galn / LPS group. The animals in the above groups were collected blood from the canthus under pentobarbital sodium anesthesia for 2 hours and 6 hours after the injection of Galn / LPS or normal saline, and the liver was obtained by laparotomy. For the determination of plasma alt, liver MDA and GSH contents and liver histopathology. Experiment 2. Animals and groups are the same as experiment 1. 1) in the control group, control group (6: 0.9% NaCl 0.2 ml, i.p.) and lipopolysaccharide group (LPS-5 mg 路kg-1 路kg ~ (-1) 路kg ~ (-1)) n24% LPS-5 mg 路kg ~ (-1) 路L ~ (-1) 路L ~ (-1) + n24% NAC 150 mg / kg 路L ~ (-1) 路L ~ (-1). 1 h after intragastric administration of LPS 5 mg / kg i.p., LPS 5 mg / kg i.p. was injected intraperitoneally at 0.5 h after injection of LPS or normal saline for 2 h and 6 h, respectively. The liver was anesthetized with pentobarbital sodium. The expression of MEK1 / 2mmpMAPKSTAT1STAT3 and HSP 70 were detected by Western blotting. The content of TNF- 偽 in liver was measured by radioimmunoassay. Experiment 3. Forty male Kunming mice were divided into 3 groups. Kupffer cells (KCs1) were isolated from Kupffer cells and cultured for 24 h. The control group was divided into two groups: the control group was divided into two groups: direct collection of KCs and culture medium supernatant / lipopolysaccharide added 100 ng/ml LPS for 0.5 h or 1 h, and KCs and the supernatant of KCs and the supernatant of NAC LPS for 2 h, then cultured in DMEM medium containing NAC(10 mmol / L for 2 h. The DMEM base containing LPS(100 / ml was added to the culture medium for 0.5 h or 1 h. The supernatants of KCs and culture medium were collected. The expression of STAT3 and HSP70 in supernatant of KCs and culture medium was detected by the same method as experiment 2. The expression of STAT3 and HSP70 in the supernatant of KCs and the supernatant of culture medium was detected by the same method as that of the supernatant. Results the acute liver injury induced by GalN/LPS was significantly alleviated by the pretreatment of GalN/LPS. The plasma ALT activity and hepatic MDA content decreased significantly after NAC preconditioning. The phosphorylation of MEK1 / 2ERK1 / 2p38MAPK in liver and Kupffer cells was significantly enhanced by GSH. The phosphorylation of p-MEK1 / 2pERK1 / 2 was restored to the basic level at 0.5 h after LPS stimulation. The levels of TNF- 偽 in liver homogenate and KCs medium also increased significantly. STAT1 and STAT3 reached the peak at 1 h after LPS stimulation and maintained a high level of phosphorylation. NAC. Pretreatment significantly inhibited phosphorylation of LPS induced liver or KCs MEK1 / 2 ERK1 / 2 p38 MAPKP STAT1 and STAT3. At the same time, the expression of TNF- 偽 in the supernatant of liver or KCs medium decreased significantly, and the expression of HSP70 was significantly higher than that of the control group at 0.5 h after stimulation with LPS. Conclusion ROSmediated by KCs may play an important role in signal transduction of MAPK and STAT, and increase the release of TNF- 偽. NAC can partly inhibit the cellular signal transduction mediated by LPS and decrease the release of TNF- 偽 through its antioxidant stress. The increased expression of HSP 70 under the action of LPS may be an important self-protective mechanism against LPS induced liver injury.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：1671859