發(fā)布時間：2018-03-24 02:25

  本文選題：金黃色葡萄球菌　切入點(diǎn)：FnBPA　出處：《中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2007年碩士論文

【摘要】： 金黃色葡萄球菌(以下簡稱金葡菌)是革蘭染色陽性病原菌，，能引起多種疾病。過去研究認(rèn)為金葡菌屬于胞外寄生菌。但近來的研究表明，金葡菌可以侵襲多種非專職吞噬細(xì)胞，F(xiàn)nBP蛋白是介導(dǎo)金葡菌侵襲宿主細(xì)胞的關(guān)鍵表面蛋白。 研究認(rèn)為FnBP蛋白通過與纖連蛋白結(jié)合從而介導(dǎo)細(xì)菌與細(xì)胞的結(jié)合，其中FnBPA與纖連蛋白結(jié)合的關(guān)鍵位點(diǎn)位于蛋白D結(jié)構(gòu)域，以重復(fù)序列為單位，包括3個連續(xù)的完整的重復(fù)序列D1、D2、D3和一個截短的D_4序列。由于空間位阻的關(guān)系，如果FnBP僅僅以重復(fù)序列為單位結(jié)合Fn分子，勢必造成實(shí)際結(jié)合位點(diǎn)的減少和D4截短序列功能的冗余。為保證最大限度的生物利用和結(jié)合，我們推測FnBPA D domain中的Fn結(jié)合位點(diǎn)可能并不是以重復(fù)序列為單位的，某些截短的重復(fù)序列或具有結(jié)合功能，或和下一個重復(fù)序列的一部分組合產(chǎn)生新的結(jié)合位點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)的目的是對以上推測進(jìn)行初步驗(yàn)證。 根據(jù)文獻(xiàn)報道，我們建立了細(xì)菌侵襲293細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�，并通過此模型找到了金葡菌有效侵襲株04018作為實(shí)驗(yàn)用菌株。利用基因工程的方法，克隆了04018菌株的FnBPA蛋白D_1區(qū)C端和D_2區(qū)N端肽段的基因片段，在大腸桿菌中表達(dá)了GST與該肽(FnBPA-D1c/D2n)的融合蛋白。ELISA實(shí)驗(yàn)證實(shí)融合蛋白中的目的肽能夠結(jié)合Fn，細(xì)菌侵襲細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)證實(shí)融合蛋白的目的肽能夠抑制金葡菌侵襲293細(xì)胞，蛋白的50％抑制劑量約為20μg/ml，相當(dāng)于2.5μg/ml肽。 通過本課題的研究，我們找到了金葡菌FnBPA蛋白中與纖連蛋白結(jié)合的新的位點(diǎn)，提示FnBPA蛋白的D結(jié)構(gòu)域中或者具有更小的結(jié)合單位，或者存在更多的Fn結(jié)合位點(diǎn)，而不是預(yù)測的3-4個，并為抑制金葡菌侵襲細(xì)胞的應(yīng)用研究提供了一定的基礎(chǔ)。
[Abstract]:Staphylococcus aureus (S. aureus) is a Gram-positive pathogen, can cause a variety of diseases. The past research that Staphylococcus aureus belongs to extracellular bacteria. But recent research showed that Staphylococcus aureus can invade a variety of non professional phagocytic cells, FnBP protein is a key surface protein mediated Staphylococcus aureus the invasion of the host cell.
Studies suggest that FnBP protein by binding protein and fiber combination and even mediated by bacteria and cells, one of the key sites of FnBPA and fibronectin binding protein in the D domain, to repeat units, including 3 consecutive complete repeat sequences of D1, D2, D_4 sequence D3 and a truncated. Because the relationship between the steric, if only to FnBP repeat units with Fn molecules, will inevitably result in redundant actual binding sites decreased and D4 truncated sequence function. In order to ensure the maximum bioavailability and the combination of FnBPA D domain, we speculate that Fn binding sites may not repeat units, repeat some sequence truncated or binding function, and a repeat or part of a combination of new binding sites. The purpose of this experiment is to verify the above speculation.
According to the literatures, we established the experimental model of bacterial invasion of 293 cells, and through this model to find the effective strains of Staphylococcus aureus invasion 04018 as experimental strains. Using the method of genetic engineering, cloning gene fragment of FnBPA protein D_1 C 04018 strain and D_2 N end peptide in Escherichia coli. The expression of GST and the peptide (FnBPA-D1c/D2n) fusion protein.ELISA fusion protein in the experiment confirmed that the target peptide is capable of binding to Fn cells, bacterial invasion experiments confirmed that the target peptide fusion protein can inhibit Staphylococcus aureus invasion of 293 cells, 50% protein inhibitor was about 20 g/ml, equivalent to 2.5 g/ml peptide.
Through this study, we found FnBPA protein of Staphylococcus aureus and fibronectin binding new sites, suggesting that FnBPA protein D domain or in combination with smaller units, or there are more Fn binding sites, 3-4 rather than forecast, and provide a basis for the application of research inhibition of Staphylococcus aureus invasion.

【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R378

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本文編號：1656304