本文選題：HEK293細(xì)胞　切入點(diǎn)：凋亡　出處：《南京師范大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：鎘可以誘導(dǎo)機(jī)體多種組織細(xì)胞發(fā)生凋亡。研究鎘誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡對(duì)于鎘的分子毒理學(xué)機(jī)制的闡明和鎘所致的損傷與致癌機(jī)理的研究具有重要意義。本文對(duì)鎘誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)生機(jī)制作了如下研究工作： 1 鎘誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞凋亡與DNA損傷 在37℃、5％CO_2條件下，HEK 293細(xì)胞分別在不同濃度氯化鎘和N-乙酰半胱氨酸的10％小牛血清DMEM培養(yǎng)液中孵育6-8小時(shí)后，用MTT染色檢測細(xì)胞生長抑制，臺(tái)盼藍(lán)染色檢測細(xì)胞死亡率，丫啶橙／溴乙啶雙熒光染色檢測細(xì)胞凋亡率，以瓊脂糖凝膠電泳DNA Ladder檢測細(xì)胞DNA損傷。結(jié)果顯示：不同濃度的鎘離子能不同程度地誘導(dǎo)HEK 293細(xì)胞的凋亡，并呈現(xiàn)劑量效應(yīng)正相關(guān)，其細(xì)胞DNA也不同程度的出現(xiàn)DNA ladder現(xiàn)象。提示：鎘能引起HEK 293細(xì)胞的凋亡并引起DNA損傷。 2 鎘誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞凋亡的線粒體途徑 通過激光共聚焦技術(shù)，以羅丹明123為探針實(shí)時(shí)監(jiān)測HEK 293細(xì)胞線粒體膜電位水平及其變化規(guī)律，通過流式細(xì)胞術(shù)分別以DCFH-DA和羅丹明123為探針檢測鎘誘導(dǎo)以及N-乙酰半胱氨酸共處理的鎘誘導(dǎo)細(xì)胞的胞內(nèi)ROS水平和線粒體膜電位。結(jié)果顯示：鎘離子可導(dǎo)致HEK 293細(xì)胞線粒體膜電位失去節(jié)律變化特征并大幅下降從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。 3 鎘誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞凋亡與Bcl-2抗凋亡作用 建立以pcDNA3／Bcl-2轉(zhuǎn)染的HEK 293 Bcl-2過表達(dá)細(xì)胞作為研究對(duì)象，，通過激光共聚焦技術(shù)，以羅丹明123為探針實(shí)時(shí)監(jiān)測HEK 293細(xì)胞線粒體膜電位水平及其變化規(guī)律。以Western蛋白印跡法檢測胞內(nèi)Caspase-3和Bcl-2的表達(dá)水平。以瓊脂糖凝膠電泳DNA ladder檢測DNA損傷。結(jié)果顯示：Bcl-2
[Abstract]:Cadmium can induce apoptosis in many tissues and cells. The study of cadmium induced apoptosis is important for elucidating the molecular toxicological mechanism of cadmium and studying the mechanism of damage and carcinogenesis induced by cadmium. The mechanism of apoptosis was studied as follows:. 1 cadmium induced apoptosis and DNA damage in HEK293 cells. After incubating in 10% calf serum DMEM medium with different concentrations of cadmium chloride and N-acetylcysteine for 6-8 hours, the cell growth inhibition was detected by MTT staining, and the cell death rate was detected by trypan blue staining. The apoptosis rate was detected by acridine orange / ethidium bromide double fluorescence staining, and the DNA damage was detected by agarose gel electrophoresis (DNA Ladder). The results showed that different concentrations of cadmium ions could induce apoptosis of HEK 293 cells to different extent. There was a positive dose-effect correlation, and the DNA ladder phenomenon appeared in the DNA of the cells to some extent. It was suggested that cadmium could induce HEK. 293 cells apoptosis and DNA damage. Mitochondrial Pathway of cadmium induced apoptosis in HEK293 cells. The mitochondrial membrane potential of HEK 293 cells was monitored by laser confocal technique with Rhodamine 123 as a probe. The intracellular ROS level and mitochondrial membrane potential of cadmium induced cells and N-acetylcysteine co-treated cells were detected by flow cytometry using DCFH-DA and Rhodamine 123 as probes, respectively. The results showed that cadmium ion could induce HEK 293 fine. Mitochondrial membrane potential (MMP) lost its rhythmic characteristics and decreased significantly, leading to apoptosis. 3 cadmium induced apoptosis of HEK293 cells and Anti-apoptotic effect of Bcl-2. HEK 293 Bcl-2 overexpression cells transfected with pcDNA3/Bcl-2 were established as the research object, and laser confocal technique was used. The mitochondrial membrane potential of HEK 293 cells was monitored by Rhodamine 123 as a probe, the expression of Caspase-3 and Bcl-2 was detected by Western Western blotting, and DNA damage was detected by agarose gel electrophoresis (DNA ladder).
【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：1647151