本文選題：畢赤酵母　切入點(diǎn)：阿片肽　出處：《江南大學(xué)》2005年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：阿片肽是一類生物活性多肽,在神經(jīng)內(nèi)分泌與免疫調(diào)節(jié)中起重要的調(diào)節(jié)作用,具有鎮(zhèn)痛,鎮(zhèn)靜,調(diào)節(jié)免疫,促進(jìn)攝食,調(diào)節(jié)睡眠,緩解壓力和緊張,抑制胃腸道運(yùn)動(dòng)和消化液分泌,影響生殖和泌乳,調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)功能等生理活性,其在醫(yī)藥和動(dòng)物生產(chǎn)中有著廣闊的應(yīng)用前景。 本研究從基因重組阿片肽發(fā)酵表達(dá)條件的優(yōu)化開始,使用新的阿片肽定量研究方法,進(jìn)行了基因重組阿片肽的分離純化工作,并結(jié)合國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀,著重研究了分離純化得到的3種阿片肽對(duì)小鼠非特異性免疫,細(xì)胞免疫和體液免疫各項(xiàng)指標(biāo)的影響;利用RT-PCR方法,從基因轉(zhuǎn)錄水平,研究了體內(nèi)兩種給藥方式下3種阿片肽對(duì)小鼠體內(nèi)不同臟器組織的μ阿片受體,δ阿片受體以及肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體PepT1 mRNA豐度變化情況;初步研究了阿片肽對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。 1.利用基因重組畢赤酵母發(fā)酵表達(dá)阿片肽 對(duì)基因重組畢赤酵母的表達(dá)條件進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明,畢赤酵母對(duì)外源阿片肽表達(dá)的最優(yōu)搖瓶發(fā)酵條件為:培養(yǎng)基BMMY(pH5.6),甲醇誘導(dǎo)濃度0.75%,菌體起始濃度40 OD600,搖床設(shè)定溫度28℃,轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)/分鐘。按以上條件進(jìn)行表達(dá),N-Tyr肽含量達(dá)到了201.1mg/L。 2.阿片肽的提取分離和活性鑒定 建立了一套基因重組阿片肽的分離純化方法。將基因重組畢赤酵母經(jīng)適宜的生長(zhǎng)和表達(dá)培養(yǎng)后,所得的發(fā)酵液經(jīng)離心得無細(xì)胞上清液,上清液超濾后過Sephadex G-10柱,將所得具有阿片活性的粗品用HPLC-MS分析,依據(jù)分子量確定活性組分中可能存在的阿片肽,然后根據(jù)這些阿片肽的等電點(diǎn)和疏水性,利用?KTA Purifier 100快速純化系統(tǒng)的DEAE-陰離子交換柱和Sephasil peptide C18反相高壓液相柱分離得到六種阿片肽,鑒定純度后測(cè)定其氨基酸組成。六種阿片肽分別為YGGFM、YGGFMT、YPFPGPI、YPFPGPIR、YPFPGPIRYG和YGGFMTSEK,其中YGGFMT、YPFPGPIR、YPFPGPIRYG和YGGFMTSEK目前尚未見報(bào)道。 3.不同類型阿片肽對(duì)小鼠免疫細(xì)胞的免疫作用 從分離純化出的六種阿片肽中選出OP1(YPFPGPI,β-CM-7)、OP2(YPFPGPIRYG)和OP3(YGGFM,M-Enk)三種阿片肽進(jìn)行后續(xù)的研究工作。利用體外細(xì)胞培養(yǎng)法研究三種阿片肽對(duì)小鼠的免疫作用。研究發(fā)現(xiàn),三種阿片肽對(duì)體外培養(yǎng)小鼠的免疫細(xì)胞呈雙向調(diào)節(jié)作用。阿片肽的濃度一般在10-7mol/L時(shí),刺激或抑制作用表現(xiàn)最強(qiáng)。且體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明,OP1對(duì)胸腺和脾細(xì)胞的作用是通過胸腺和脾細(xì)胞上的經(jīng)典阿片受體和非經(jīng)典阿片受體(能夠被阿片受體拮抗劑納酪酮逆轉(zhuǎn)的為經(jīng)典阿片受體,反之為非經(jīng)典阿片受體)共同完成的;OP2和OP3對(duì)胸腺和脾細(xì)胞的作用是完全通過胸腺和脾細(xì)胞上的經(jīng)典阿片受體完成的。 4.體內(nèi)法研究不同類型阿片肽對(duì)小鼠的免疫作用 采用腹腔注射和飲水中添加阿片肽的方法研究阿片肽對(duì)小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。研究
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 陳洪章,李佐虎;酵母菌的高密度發(fā)酵[J];工業(yè)微生物;1998年01期

2 李晶,趙曉祥,沙長(zhǎng)青,張淑梅,田潔萍;甲醇酵母基因表達(dá)系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J];生物工程進(jìn)展;1999年02期

3 許華,李靜梅;歐瑞血活素對(duì)環(huán)磷酰胺模型小鼠免疫功能的影響[J];中國(guó)新藥雜志;2002年11期

，

本文編號(hào)：1644864