本文選題：漢坦病毒　切入點：核蛋白　出處：《中國科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：腎綜合征出血熱(HFRS)是我國廣泛流行的一種人獸共患的急性病毒性傳染病,目前該病在我國的發(fā)病率占全球總數(shù)的90%,病死率為3%～10%,是除病毒性肝炎外危害最大的一類病毒性疾病。腎綜合征出血熱(HFRS)是由布尼亞病毒科漢坦病毒屬病毒引起的自然疫源性傳染病,臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣,病情變化較快,給臨床診斷帶來一定困難。目前,血清學(xué)檢測方法仍然是HFRS的主要檢測手段,但是以往的血清學(xué)診斷方法,如間接免疫熒光試驗、斑點免疫結(jié)合試驗、帶狀免疫斑點試驗等敏感性和特異性不夠高,因此有必要建立一種高靈敏的、高特異的、簡便的HFRS輔助診斷技術(shù)。漢坦病毒核蛋白抗原(NP)在人體液免疫反應(yīng)中起重要作用,據(jù)此本研究針對上述需求發(fā)展了由單鏈抗體(scFv)介導(dǎo)的免疫熒光蛋白質(zhì)芯片和免疫PCR檢測方法。 將抗?jié)h灘病毒核蛋白的單鏈抗體基因與堿性磷酸酶基因融合,獲得了堿性磷酸酶介導(dǎo)的檢測抗體;將單鏈抗體用Cy3 標(biāo)記以及將抗體基因C 末端融合SBP基因,表達(dá)出的融合蛋白可以與鏈霉親和素修飾的熒光納米顆粒結(jié)合,實現(xiàn)了在蛋白質(zhì)芯片上檢測漢灘病毒核蛋白。本研究由單鏈抗體介導(dǎo)的免疫熒光蛋白質(zhì)芯片檢測方法,可在短時間內(nèi)檢測到10 pg/ml 的核蛋白;通過應(yīng)用免疫-PCR方法檢測到了更低濃度的核蛋白(10 fg/ml),這些方法的靈敏度都高于傳統(tǒng)的ELISA(1 μg/ml)檢測方法。另外,我們初步嘗試了應(yīng)用熒光高聚物實施NP 的均相檢測,相比于其他方法,它是非常簡便迅速,幾分鐘內(nèi)可檢測到10 ng/ml的核蛋白。
[Abstract]:Hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRSs) is an acute viral infectious disease with zoonotic disease, which is widely prevalent in China. At present, the incidence of the disease in China accounts for 90% of the global total, and the mortality rate is 3100.It is the most harmful virus disease besides viral hepatitis. Hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRSs) is caused by Bunyaviridae Hantavirus. Natural infectious diseases, At present, serological detection is still the main method for the detection of HFRS, but the previous serological diagnosis methods, such as indirect immunofluorescence test, are difficult to diagnose. The sensitivity and specificity of dot immunobinding assay and band immunodot test are not high enough, so it is necessary to establish a highly sensitive, highly specific, and so on. The hantavirus nucleoprotein antigen (HFRS) plays an important role in human humoral immune response. In view of the above requirements, a novel immunofluorescent protein chip mediated by scFvv-mediated immunofluorescence protein chip and immunological PCR detection method were developed. The detection antibody mediated by alkaline phosphatase was obtained by fusion of the single chain antibody gene against Hantaan virus nucleoprotein with alkaline phosphatase gene, and SBP gene was fused with Cy3 labeling and C-terminal antibody gene. The expressed fusion protein can bind to streptavidin modified fluorescent nanoparticles and detect Hantaan virus nucleoprotein on protein chip. In this study immunofluorescence protein chip mediated by single chain antibody was used to detect Hantaan virus nucleoprotein. Nuclear proteins of 10 pg/ml can be detected in a short period of time, and lower concentrations of 10 FG / ml can be detected by immune-PCR method, which are more sensitive than traditional ELISA(1 渭 g / ml methods. We have preliminarily tried to use fluorescent polymers to carry out homogenous detection of NP. Compared with other methods, it is very simple and rapid, and can detect nuclear proteins of 10 ng/ml in a few minutes.
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R392.1

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本文編號：1643567