本文選題：樹突狀細(xì)胞　切入點(diǎn)：脂多糖　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的本研究取正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),建立體外誘導(dǎo)培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞(DC)的方法,進(jìn)而探討內(nèi)毒素對(duì)人DC成熟的影響。 方法用rhGM-CSF、rhIL-4、Flt3-L和TNF-α體外誘導(dǎo)人外周血單個(gè)核細(xì)胞向DC分化,培養(yǎng)12天后收集DC。將細(xì)胞分為六組:①無(wú)LPS處理組;②0.5μg/ml LPS處理組;③1μg/ml LPS處理組;④1.5μg/ml LPS處理組;⑤2μg/ml LPS處理組;⑥5μg/ml LPS處理組。LPS均在培養(yǎng)的第11天加入。在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài),采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DC的表型,通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測(cè)DC刺激T淋巴細(xì)胞的能力,用ELISA法檢測(cè)DC分泌細(xì)胞因子IL-12、IFN-γ的水平。 結(jié)果 1、體外培養(yǎng)12天后獲得形態(tài)典型的DC,細(xì)胞存活率均在90%以上。 2、培養(yǎng)第1天細(xì)胞CD14表達(dá)較高,CD80、CD83、CD86及HLA-DR表達(dá)較低,而培養(yǎng)12天后,CD14表達(dá)明顯降低,CD80、CD83、CD86及HLA-DR表達(dá)明顯升高。不同濃度LPS處理組與無(wú)LPS處理組相比,這種趨勢(shì)更加明顯(P0.05),但與LPS劑量依賴性不明顯(P0.05)。 3、不同濃度LPS處理組刺激同種異體T細(xì)胞增殖的能力均高于無(wú)LPS處理組(P0.05),與LPS劑量依賴性不明顯(P0.05)。 4、不同濃度LPS處理組分泌IL-12和IFN-γ的能力明顯高于無(wú)LPS處理組(P0.05),與LPS劑量依賴性不明顯(P0.05)。 結(jié)論取正常人PBMC,聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF(1000u/ml),rhIL-4(1000u/ml),rh Flt3-L(50ng/ml)及TNF-α(1000u/ml),在體外可誘導(dǎo)出具有典型形態(tài)、表型及生物學(xué)活性的DC。經(jīng)LPS處理后DC發(fā)育更加成熟,表現(xiàn)為突起更加明顯,特征性表面分子表達(dá)更高,刺激同種異體T淋巴細(xì)胞增殖的能力更強(qiáng),分泌相關(guān)細(xì)胞因子的能力更高,在一定濃度范圍內(nèi),這種特性與LPS劑量依賴性不明顯。說(shuō)明在DC誘導(dǎo)培養(yǎng)的后期,LPS可以進(jìn)一步促進(jìn)DC的成熟,由此可以進(jìn)一步推斷DC疫苗經(jīng)體外誘導(dǎo)培養(yǎng)后注入伴有腸源性內(nèi)毒素血癥的肝病患者體內(nèi)其療效將會(huì)更加明顯,這為DC疫苗用于內(nèi)毒素血癥患者的免疫治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:Objective to study the effect of endotoxin on the maturation of dendritic cells (DC) from normal human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). Methods Human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were induced to differentiate into DC by rhGM-CSF- rhIL-4Flt3-L and TNF- 偽 in vitro. After 12 days of culture, the cells were divided into six groups: 1 without LPS treatment group, 20.5 渭 g / ml LPS group, 31 渭 g / ml LPS group, 41.5 渭 g / ml LPS treatment group, 52 渭 g / ml LPS treatment group, 65 渭 g / ml LPS treatment group, respectively, on the 11th day of culture. The morphology of cells was observed under inverted microscope. The phenotype of DC was detected by flow cytometry, the ability of DC to stimulate T lymphocytes was detected by mixed lymphocyte reaction, and the level of IL-12 IFN- 緯 secreted by DC was detected by ELISA method. Results. 1. After 12 days of culture in vitro, typical DCs were obtained, and the cell survival rate was above 90%. 2. On the first day of culture, the expression of CD14 was higher than that of CD80, CD83, CD86 and HLA-DR, but the expression of CD14 decreased significantly after 12 days of culture. The expression of CD83, CD86 and HLA-DR in the cells treated with different concentrations of LPS was significantly higher than that in the group without LPS. This trend is more obvious than that of LPS, but it is not significantly related to the dose dependence of LPS. 3. The ability of stimulating the proliferation of allogeneic T cells in different concentrations of LPS treatment group was higher than that in the control group without LPS treatment (P 0.05), but not in a dose-dependent manner with LPS. 4. The ability of secreting IL-12 and IFN- 緯 in different concentration of LPS treatment group was significantly higher than that in the control group without LPS treatment, but had no significant dose-dependent relationship with LPS. Conclusion\\\;\\\. The ability of stimulating the proliferation of allogeneic T lymphocytes is stronger and the ability of secreting related cytokines is higher in a certain concentration range. This characteristic is not obvious with the dose dependence of LPS, which indicates that LPs can further promote the maturation of DC at the late stage of DC induction culture. It can be further concluded that the effect of DC vaccine injected into liver disease patients with intestinal endotoxemia after induction and culture in vitro will be more obvious, which provides experimental basis for DC vaccine to be used in immunotherapy of patients with endotoxemia.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R392

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