本文選題：樹突狀細胞　切入點：脂多糖　出處：《山西醫(yī)科大學》2006年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 目的本研究取正常人外周血單個核細胞(PBMC),建立體外誘導(dǎo)培養(yǎng)樹突狀細胞(DC)的方法,進而探討內(nèi)毒素對人DC成熟的影響。 方法用rhGM-CSF、rhIL-4、Flt3-L和TNF-α體外誘導(dǎo)人外周血單個核細胞向DC分化,培養(yǎng)12天后收集DC。將細胞分為六組:①無LPS處理組;②0.5μg/ml LPS處理組;③1μg/ml LPS處理組;④1.5μg/ml LPS處理組;⑤2μg/ml LPS處理組;⑥5μg/ml LPS處理組。LPS均在培養(yǎng)的第11天加入。在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài),采用流式細胞術(shù)檢測DC的表型,通過混合淋巴細胞反應(yīng)檢測DC刺激T淋巴細胞的能力,用ELISA法檢測DC分泌細胞因子IL-12、IFN-γ的水平。 結(jié)果 1、體外培養(yǎng)12天后獲得形態(tài)典型的DC,細胞存活率均在90%以上。 2、培養(yǎng)第1天細胞CD14表達較高,CD80、CD83、CD86及HLA-DR表達較低,而培養(yǎng)12天后,CD14表達明顯降低,CD80、CD83、CD86及HLA-DR表達明顯升高。不同濃度LPS處理組與無LPS處理組相比,這種趨勢更加明顯(P0.05),但與LPS劑量依賴性不明顯(P0.05)。 3、不同濃度LPS處理組刺激同種異體T細胞增殖的能力均高于無LPS處理組(P0.05),與LPS劑量依賴性不明顯(P0.05)。 4、不同濃度LPS處理組分泌IL-12和IFN-γ的能力明顯高于無LPS處理組(P0.05),與LPS劑量依賴性不明顯(P0.05)。 結(jié)論取正常人PBMC,聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF(1000u/ml),rhIL-4(1000u/ml),rh Flt3-L(50ng/ml)及TNF-α(1000u/ml),在體外可誘導(dǎo)出具有典型形態(tài)、表型及生物學活性的DC。經(jīng)LPS處理后DC發(fā)育更加成熟,表現(xiàn)為突起更加明顯,特征性表面分子表達更高,刺激同種異體T淋巴細胞增殖的能力更強,分泌相關(guān)細胞因子的能力更高,在一定濃度范圍內(nèi),這種特性與LPS劑量依賴性不明顯。說明在DC誘導(dǎo)培養(yǎng)的后期,LPS可以進一步促進DC的成熟,由此可以進一步推斷DC疫苗經(jīng)體外誘導(dǎo)培養(yǎng)后注入伴有腸源性內(nèi)毒素血癥的肝病患者體內(nèi)其療效將會更加明顯,這為DC疫苗用于內(nèi)毒素血癥患者的免疫治療提供了實驗依據(jù)。
[Abstract]:Objective to study the effect of endotoxin on the maturation of dendritic cells (DC) from normal human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). Methods Human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were induced to differentiate into DC by rhGM-CSF- rhIL-4Flt3-L and TNF- 偽 in vitro. After 12 days of culture, the cells were divided into six groups: 1 without LPS treatment group, 20.5 渭 g / ml LPS group, 31 渭 g / ml LPS group, 41.5 渭 g / ml LPS treatment group, 52 渭 g / ml LPS treatment group, 65 渭 g / ml LPS treatment group, respectively, on the 11th day of culture. The morphology of cells was observed under inverted microscope. The phenotype of DC was detected by flow cytometry, the ability of DC to stimulate T lymphocytes was detected by mixed lymphocyte reaction, and the level of IL-12 IFN- 緯 secreted by DC was detected by ELISA method. Results. 1. After 12 days of culture in vitro, typical DCs were obtained, and the cell survival rate was above 90%. 2. On the first day of culture, the expression of CD14 was higher than that of CD80, CD83, CD86 and HLA-DR, but the expression of CD14 decreased significantly after 12 days of culture. The expression of CD83, CD86 and HLA-DR in the cells treated with different concentrations of LPS was significantly higher than that in the group without LPS. This trend is more obvious than that of LPS, but it is not significantly related to the dose dependence of LPS. 3. The ability of stimulating the proliferation of allogeneic T cells in different concentrations of LPS treatment group was higher than that in the control group without LPS treatment (P 0.05), but not in a dose-dependent manner with LPS. 4. The ability of secreting IL-12 and IFN- 緯 in different concentration of LPS treatment group was significantly higher than that in the control group without LPS treatment, but had no significant dose-dependent relationship with LPS. Conclusion\\\;\\\. The ability of stimulating the proliferation of allogeneic T lymphocytes is stronger and the ability of secreting related cytokines is higher in a certain concentration range. This characteristic is not obvious with the dose dependence of LPS, which indicates that LPs can further promote the maturation of DC at the late stage of DC induction culture. It can be further concluded that the effect of DC vaccine injected into liver disease patients with intestinal endotoxemia after induction and culture in vitro will be more obvious, which provides experimental basis for DC vaccine to be used in immunotherapy of patients with endotoxemia.
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蘇剛;孫宗全;陳家軍;董念國;劉超;鄧勇志;王國華;;NBD多肽對小鼠樹突狀細胞成熟狀態(tài)的影響[J];中華實驗外科雜志;2007年10期

2 郭路生;張佩;倫恒忠;嚴曉芳;;霍亂毒素B亞單位對樹突狀細胞成熟的影響[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年44期

3 鄭瑾;劉強;李燕;楊建棟;馬驥;劉堯;劉文超;;脂多糖刺激前后樹突狀細胞CD44、CD24基因的表達[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2011年03期

4 邱勇,胡永秀,孫明潔,劉振龍,安云慶;4種細胞因子組合方式對小鼠樹突狀細胞分化發(fā)育的影響[J];免疫學雜志;2005年S1期

5 李羅清,孫圣剛,曹學兵,王云甫,常麗英;早期脂多糖干預(yù)對大鼠樹突狀細胞表型和功能的影響[J];免疫學雜志;2005年03期

6 陳月;余新沛;劉瑩;陳政良;;MBL對LPS誘導(dǎo)樹突狀細胞成熟的調(diào)節(jié)作用[J];免疫學雜志;2006年04期

7 陳家軍;孫宗全;董念國;蘇剛;劉超;劉金平;鄧勇志;;RNA干擾抑制MyD88表達對小鼠骨髓樹突狀細胞生物學活性的影響[J];細胞與分子免疫學雜志;2007年03期

8 陳家軍;孫宗全;蘇剛;劉超;劉金平;鄧勇志;史嘉瑋;;MyD88 RNA干擾抑制小鼠骨髓樹突狀細胞成熟的實驗研究[J];中國免疫學雜志;2007年09期

9 駱德平;李勇;李代慶;季平;王濤;邱麗華;劉平;;小鼠樹突狀細胞經(jīng)脂多糖誘導(dǎo)成熟前后超微結(jié)構(gòu)的適應(yīng)性變化[J];華西口腔醫(yī)學雜志;2009年03期

10 眭建;吳衛(wèi)疆;王曉鶯;許化溪;;脂多糖激發(fā)樹突狀細胞對過敏性哮喘小鼠的影響[J];中國藥學雜志;2007年22期

相關(guān)會議論文 前10條

1 劉修恒;;小鼠骨髓源性不同成熟度樹突狀細胞培養(yǎng)鑒定[A];第十七屆全國泌尿外科學術(shù)會議論文匯編[C];2010年

2 張慶紅;胡玉珍;呂順艷;鐘延清;;雌激素影響大鼠樹突狀細胞的分化、成熟和功能[A];中國生理學會第六屆全國青年生理學工作者學術(shù)會議論文摘要[C];2003年

3 楊楊;王宏偉;胡秀芬;施虹;張龍江;溫宇;嚴清華;;小鼠樹突狀細胞LTB4-BLT表達的研究[A];中華醫(yī)學會第十四次全國兒科學術(shù)會議論文匯編[C];2006年

4 郭大偉;梁健;姜曉峰;王學范;魏云濤;姜洪磊;;GPC3基因轉(zhuǎn)染的樹突狀細胞誘導(dǎo)抗肝癌HepG2細胞殺傷作用的研究[A];第十二屆全國肝癌學術(shù)會議論文匯編[C];2009年

5 張新華;鐘翠平;顧云娣;顧曉;范強;王國強;周播江;;TGF-β1基因轉(zhuǎn)染樹突狀細胞增強移植心臟耐受性并降低Fractalkine的表達[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

6 于益芝;劉書遜;王文雅;張明徽;郭振紅;徐紅梅;齊潤姿;安華章;曹雪濤;;TRAIL在樹突狀細胞殺傷活化T細胞中的作用[A];中國免疫學會第四屆學術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

7 尤長宣;羅榮城;張軍一;蘇瑾;廖旺軍;鄭航;Paul L Hermonat;;基因轉(zhuǎn)移制備樹突狀細胞的實驗研究[A];第一屆中國腫瘤靶向治療技術(shù)大會論文集[C];2003年

8 葛長勇;李鴻鈞;孫茂盛;馮婷婷;靳昌忠;姚航平;吳南屏;;滅活SV40致敏的猴樹突狀細胞的生物學特性研究[A];2008年浙江省感染病、肝病學術(shù)年會論文匯編[C];2008年

9 葛長勇;李鴻鈞;謝天宏;張光明;易山;孫茂盛;吳南屏;;恒河猴樹突狀細胞的生物學特性研究[A];中華醫(yī)學會第四次全國艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國熱帶病學術(shù)會議論文匯編[C];2009年

10 張堯;靳風爍;蘭衛(wèi)華;李彥峰;張克勤;吳剛;葉錦;;聯(lián)合應(yīng)用塞萊西布和CpG-ODN對樹突狀細胞功能的影響[A];第十五屆全國泌尿外科學術(shù)會議論文集[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 王雪飛;樹突狀細胞“面目”更清晰[N];健康報;2004年

2 章靜波;干細胞研究新動向[N];健康報;2009年

3 記者 白毅;間充質(zhì)干細胞可促進成熟樹突狀細胞增殖分化[N];中國醫(yī)藥報;2009年

4 張獻懷;樹突狀細胞療法治療惡性黑色素瘤[N];中國醫(yī)藥報;2004年

5 方彤;樹突狀細胞瘤苗新進展[N];健康報;2006年

6 本報記者 沈湫莎;這一次,諾獎會不會頒給逝者[N];文匯報;2011年

7 記者　毛黎;美發(fā)現(xiàn)一種“超級”形態(tài)酶[N];科技日報;2006年

8 楊淑娟;美研究出新型丙型肝炎疫苗[N];中國醫(yī)藥報;2006年

9 ;慢性HBV感染使樹突狀細胞功能受損[N];中國醫(yī)藥報;2006年

10 章米力;瑞金醫(yī)院乙肝發(fā)病機制研究獲進展[N];健康報;2007年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 潘建平;γ-干擾素對樹突狀細胞分化和功能成熟的調(diào)控及其基因修飾的樹突狀細胞抗腫瘤免疫機制研究[D];浙江大學;2002年

2 朱偉國;PPAR-γ激動劑吡格列酮抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)樹突狀細胞免疫激活致動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定的研究[D];浙江大學;2010年

3 王正昕;腫瘤微環(huán)境中浸潤性樹突狀細胞的表型和免疫學功能的研究及其臨床意義[D];第二軍醫(yī)大學;2000年

4 周向陽;新型熱休克蛋白HSP-DC激活樹突狀細胞及其佐劑效應(yīng)研究[D];第二軍醫(yī)大學;2003年

5 趙鴻;未成熟樹突狀細胞聯(lián)合骨髓移植誘導(dǎo)大鼠異體腎移植免疫耐受的研究[D];復(fù)旦大學;2003年

6 陳玉丙;樹突狀細胞抗原負載及MAGE-3 DNA瘤苗研制[D];吉林大學;2004年

7 王宏偉;肺間質(zhì)樹突狀細胞在多器官功能障礙綜合征中的免疫激活與免疫耐受作用研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2010年

8 趙毅;青藤堿對RA患者樹突狀細胞免疫功能的影響及機制研究[D];第一軍醫(yī)大學;2007年

9 劉海波;Fas信號激活樹突狀細胞炎性復(fù)合體形成的生物學意義與分子機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2010年

10 趙娟;受者來源的PIR-B轉(zhuǎn)染的樹突狀細胞對小鼠異基因骨髓移植GVHD的保護作用[D];華中科技大學;2010年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 王志剛;LPS刺激的小鼠骨髓來源樹突狀細胞生長和細胞周期分析[D];第二軍醫(yī)大學;2005年

2 蒲驍麟;細胞因子對體外培養(yǎng)的樹突狀細胞的影響[D];南京醫(yī)科大學;2005年

3 駱德平;小鼠樹突狀細胞經(jīng)脂多糖誘導(dǎo)成熟前后細胞超微結(jié)構(gòu)的適應(yīng)性變化研究[D];重慶醫(yī)科大學;2009年

4 吳鳴宇;黑色素瘤基因（MAGE-1）相關(guān)肽負載樹突狀細胞對肝癌細胞殺傷作用的實驗研究[D];蘇州大學;2003年

5 孟冬梅;急性髓細胞白血病細胞來源的樹突狀細胞的誘導(dǎo)及功能研究[D];青島大學;2003年

6 梁軍利;IFN-β1a對多發(fā)性硬化樹突狀細胞分泌的細胞因子影響的研究[D];廣西醫(yī)科大學;2010年

7 黃祺琦;耐受性樹突狀細胞來源的exosome治療小鼠免疫介導(dǎo)性再生障礙性貧血的實驗研究[D];南昌大學;2010年

8 初曉霞;淋巴瘤樹突狀細胞的表達與臨床分期、惡性度及預(yù)后的相關(guān)性研究[D];青島大學;2002年

9 劉麗燕;MyD88在OK-432誘導(dǎo)樹突狀細胞成熟中的作用[D];福建醫(yī)科大學;2010年

10 郭佳;TLR配體誘導(dǎo)骨髓來源樹突狀細胞獲得產(chǎn)生全反式維甲酸的能力[D];浙江大學;2011年

，

本文編號：1639468