發(fā)布時(shí)間：2018-03-19 21:27

  本文選題：甲肝病毒表位抗原　切入點(diǎn)：乙肝病毒核心抗原　出處：《吉林大學(xué)》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：本研究為甲肝核酸疫苗的基礎(chǔ)性研究工作。應(yīng)用重疊延伸PCR 技術(shù),獲得了HAV 表位抗原與HBV 核心抗原(HBcAg)的融合基因,命名為CVPX。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過(guò)程中,設(shè)立HBc 基因(C 基因)平行對(duì)照組。將CVPX定向克隆于pET-28a(+) 原核表達(dá)載體, 構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)-CVPX,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞中,篩選陽(yáng)性克隆,轉(zhuǎn)化至BL21(DE3)宿主菌中,利用IPTG 誘導(dǎo)目的基因在大腸桿菌中表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物以包涵體形式存在。表達(dá)產(chǎn)物能與抗-HAV 抗體發(fā)生特異性的抗原-抗體反應(yīng)。同時(shí)將CVPX定向克隆于pVAX1 真核表達(dá)載體,成功構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-CVPX,利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染CHO 細(xì)胞,mRNA 水平上檢測(cè)到目的基因進(jìn)行了有效轉(zhuǎn)錄,蛋白質(zhì)水平上檢測(cè)到表達(dá)的蛋白具有HAV 抗原的反應(yīng)原性。
[Abstract]:In this study, the fusion gene of HAV epitope antigen and HBV core antigen HBcAgwas obtained by using overlapping extended PCR technique. The fusion gene was named CVPX during the experiment. The CVPX was cloned into the prokaryotic expression vector pET-28a (pET-28a) and transformed into Escherichia coli DH5 偽 competent cells. IPTG was used to induce the expression of the target gene in Escherichia coli, and the expression product was in the form of inclusion body. The expressed product could react with the anti-HAV antibody specifically. At the same time, the CVPX was cloned into the eukaryotic expression vector of pVAX1. The eukaryotic expression plasmid pVAX1-CVPXwas successfully constructed, and the target gene was detected by liposome transfection into CHO cells for effective transcription. At the protein level, the expressed protein showed the reactivity of HAV antigen.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R392.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1636073