本文選題：SS2　切入點(diǎn)：MRP　出處：《南京農(nóng)業(yè)大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：豬鏈球菌2型(Streptococcus suis 2，SS2)可以導(dǎo)致豬腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、敗血癥、漿膜炎、心內(nèi)膜炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎等，對(duì)從業(yè)人員帶來嚴(yán)重的威脅，可以導(dǎo)致人的腦膜炎、心內(nèi)膜炎及中毒性休克綜合癥等嚴(yán)重疾患。目前國內(nèi)外對(duì)SS的研究主要集中在SS2毒力相關(guān)因子上，目前公認(rèn)的毒力相關(guān)因子有溶菌酶釋放蛋白(muramidasereleased protein, MRP)、胞外蛋白因子(extracellular factor protein, EF)、溶血素(suilysin,本文簡稱sly)、莢膜多糖(capsular polysaccharide, CPS)等。由于對(duì)SS2毒力因子的了解較少限制了SS疫苗的研究及豬鏈球菌病的治療與控制。本試驗(yàn)對(duì)1998年江蘇海安病人分離株Habb MRP進(jìn)行研究；對(duì)2005年四川資陽病人分離株分別進(jìn)行EF和sly的研究。制備了MRP及EF單克隆抗體，并摸索MRP ELISA檢測方法。 克隆及表達(dá)SS2人源分離株Habb mrp基因片段，構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX4T-2-mrp。在大腸桿菌中誘導(dǎo)帶有谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)標(biāo)簽的融合蛋白MRP-GST表達(dá)；經(jīng)親和層析法純化后，用凝血酶酶切去除重組蛋白中的GST，制備純化的MRP抗原。序列分析表明，獲得的mrp基因長957bp；原核表達(dá)的融合蛋白MRP-GST的分子量約61kD；凝血酶處理的MRP抗原的分子量約為35kD。Western blot分析顯示，MRP-GST、MRP蛋白均可與MRP多克隆抗血清發(fā)生特異性反應(yīng)。成功地克隆人源分離株Habb的mrp基因片段，并在原核系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)高效表達(dá)，制備的純化抗原MRP具有良好的抗原性，為開展相關(guān)免疫學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。 SS2 MRP單克隆抗體的研制及其生物學(xué)特性的鑒定。以純化的MRP-GST蛋白為免疫原，常規(guī)免疫BALB／c小鼠，采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞融合，并以經(jīng)凝血酶酶切去除GST標(biāo)簽的MRP篩選細(xì)胞，，經(jīng)反復(fù)篩選和多次克隆化培養(yǎng)，篩選出特異分泌鼠抗MRP單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。采用Western blot對(duì)單抗進(jìn)行生物學(xué)特性的鑒定。成功獲得6株持續(xù)、穩(wěn)定分泌鼠抗MRP單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名為1G1、1B6、288、3G9、2C3及3E5。 用表達(dá)純化的MRP抗原、HRP標(biāo)記的MRP抗原和一株MRP單抗腹水、以及ZY05719全菌兔多抗血清及豬多抗血清，建立檢測豬鏈球菌MRP抗原及SS MRP抗體的ELISA方法。SS MRP抗血清的檢測采用純化的MRP抗原或滅活ZY05719細(xì)菌
[Abstract]:Streptococcus suis 2 SS2) can cause meningitis, arthritis, septicemia, serositis, endocarditis, polyarthritis, etc. Serious diseases such as endocarditis and toxic shock syndrome. At present, the research on SS mainly focuses on the virulence related factors of SS2. The commonly recognized virulence related factors are lysozyme releasing protein (MRP), extracellular protein (factor), extracellular protein (EFS), hemolysin (Slycerin), capsular polysaccharide (CPSs) and so on. The knowledge of SS2 virulence factors has limited the availability of SS vaccine. Study on the treatment and control of Streptococcus suis. In 1998, the Habb MRP isolated from Haian patients in Jiangsu Province was studied. In 2005, EF and sly of Ziyang patient isolate were studied respectively. Monoclonal antibodies against MRP and EF were prepared, and MRP ELISA detection method was explored. The Habb mrp gene fragment of SS2 human isolate was cloned and expressed, and the prokaryotic expression plasmid pGEX4T-2-mrp. the fusion protein MRP-GST with glutathione transferase tag was induced in Escherichia coli and purified by affinity chromatography. The purified MRP antigen was prepared by digesting GSTs from recombinant protein by thrombin digestion. The length of mrp gene was 957 BP, the molecular weight of prokaryotic expression fusion protein MRP-GST was about 61kD. the molecular weight of thrombin treated MRP antigen was about 35kD. Western blot analysis showed that MRP-GST-MRP protein could react specifically with MRP polyclonal antiserum. The mrp gene fragment of Habb isolated from Longren strain. The purified antigen MRP was highly expressed in prokaryotic system and had good antigenicity, which laid a foundation for the study of immunology. Preparation of monoclonal antibody to SS2 MRP and identification of its biological characteristics. The purified MRP-GST protein was used as immunogen to routinely immunize BALB/c mice, and B lymphocyte hybridoma technique was used for cell fusion. MRP, which was digested by thrombin to remove the GST label, was used to screen the cells. The hybridoma cell lines secreting murine monoclonal antibody against MRP were screened. Six hybridoma cell lines, which secreted murine anti-#en3# monoclonal antibody stably and continuously, were successfully obtained by Western blot. The hybridoma cell lines were named 1G1B6C28883G9O2C3 and 3E5. HRP-labeled MRP antigens and a MRP monoclonal antibody ascites were used to express purified MRP antigens, as well as ZY05719 whole bacterial rabbit polyantibodies and porcine polyclonal antisera. Establishment of ELISA method for Detection of MRP Antigen and SS MRP Antibody of Streptococcus suis. Detection of SS MRP Antiserum using purified MRP Antigen or inactivated ZY05719 bacteria
【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳高明,李春海,毛慧生,王建軍,孫麗亞,王立梅,楊毅,王白嵐;多藥耐藥相關(guān)蛋白基因在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義[J];中國腫瘤臨床;1999年01期

2 傅建民,張偉,彭向紅,金順錢,趙東兵,馮強(qiáng),邵永孚;多藥耐藥相關(guān)蛋白在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義[J];中華普通外科雜志;1999年01期

3 楊俊蘭,石廷章,戴為民,魏秀芳;肺腺癌及鱗癌MDR1-mRNA和MRP-mRNA表達(dá)的研究[J];癌癥;2000年03期

4 呂慶杰,馬穎,張錦華,李曉晗,王曉松,姜衛(wèi)國;神經(jīng)母細(xì)胞瘤P-gp和MRP的表達(dá)及預(yù)后因素分析[J];中國腫瘤臨床;2002年12期

5 鄭靜晨,穆曉峰,彭碧波,李明,陳關(guān)信,白羽;MRP及LRP在人惡性黑色素瘤轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)組織中的表達(dá)及臨床意義研究[J];中國腫瘤臨床與康復(fù);2000年02期

6 楊俊蘭!100853北京,戴為民!100853北京,石廷章!100853北京,魏秀芳!100853北京;非小細(xì)胞肺癌MDR1-mRNA、MRP-mRNA及LRP-mRNA表達(dá)的研究[J];中國肺癌雜志;2001年03期

7 夏紅,章靜波;多藥物性耐藥的分子機(jī)制及其與P~(53)的關(guān)系[J];自然雜志;1996年01期

8 芮萌!100730,李龍蕓!100730,劉麗華,王京嵐!100730,張志庸!100730;P-gp、MRP、p53蛋白在肺癌組織中的表達(dá)及其意義[J];中國肺癌雜志;2001年01期

9 薄進(jìn)保;王靈杰;陳麗娟;;多層螺旋CT MRP及3DVR技術(shù)在診斷水平骨折線中的應(yīng)用價(jià)值[J];醫(yī)學(xué)信息(中旬刊);2010年12期

10 王新功,衡雪原,王淑霞;MRP在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)[J];神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生;2003年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 趙永晨;陳信義;李冬云;;急性白血病MRP陽性表達(dá)與中醫(yī)證候/療效關(guān)系研究[A];全國中西醫(yī)結(jié)合血液學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 楊國法;賈龍斌;宋云鋒;;改良MRP方案對(duì)缺血性腦卒中患者上肢功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

3 王存來;余冬梅;張秋余;;中小型工業(yè)企業(yè)MRPⅡ/ERP系統(tǒng)設(shè)計(jì)[A];第十七屆全國數(shù)據(jù)庫學(xué)術(shù)會(huì)議論文集（技術(shù)報(bào)告篇）[C];2000年

4 侯慧麗;唐家琪;鐘瑾;;豬鏈球菌2型(SS2)毒力因子EF/MRP在乳酸菌中的表達(dá)及其作為口服疫苗的研究[A];2008年中國微生物學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2008年

5 張建國;;礦山企業(yè)MRP系統(tǒng)與看板管理的結(jié)合[A];2011年河北省冶金信息化自動(dòng)化年會(huì)論文集[C];2011年

6 楊德成;吳志杰;;我國企業(yè)現(xiàn)行生產(chǎn)管理方法與MRPⅡ的差距[A];信息科學(xué)與微電子技術(shù):中國科協(xié)第三屆青年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];1998年

7 羅延舉;黎明;夏曉旭;何紹民;何鐘隱;;ERP管理思想及我國ERP應(yīng)用現(xiàn)狀[A];第六屆中國青年運(yùn)籌與管理學(xué)者大會(huì)論文集[C];2004年

8 朱云龍;史海波;王成恩;李貴;王博;;CIMS環(huán)境下的生產(chǎn)管理系統(tǒng)[A];1993中國控制與決策學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];1993年

9 聶芳;馬列;王群;趙明靜;王笑歌;;MRP與肺癌分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Meta分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2011（第十二次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議）論文匯編[C];2011年

10 徐裕金;王連聰;鄭曉;劉冠;王躍珍;賴宵晶;李健強(qiáng);;非小細(xì)胞肺癌組織P53、c-erbB2、MRP蛋白表達(dá)及其意義[A];2009年浙江省放射腫瘤治療學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 安捷倫科技醫(yī)療產(chǎn)品青島有限公司 粟勁;國企MRP失敗六大原因[N];中國經(jīng)營報(bào);2001年

2 ;1981年沈陽第一機(jī)床廠引入MRP——Ⅱ軟件[N];中國計(jì)算機(jī)報(bào);2009年

3 王強(qiáng);家電挾ERP以令諸侯[N];計(jì)算機(jī)世界;2002年

4 應(yīng)勇;ERP的起源[N];計(jì)算機(jī)世界;2002年

5 周青;ERP的管理思想[N];中國礦業(yè)報(bào);2000年

6 ;ERP的管理思想[N];上海金融報(bào);2002年

7 韋文國;ERP 裝備中國企業(yè)[N];中國企業(yè)報(bào);2002年

8 東風(fēng)設(shè)計(jì)院 李玉華;工業(yè)企業(yè)物流出路[N];國際經(jīng)貿(mào)消息;2002年

9 陳紹文;從根上打破ERP僵化[N];中國計(jì)算機(jī)報(bào);2001年

10 本報(bào)記者 曹開彬;轉(zhuǎn)型與希望并存[N];中國計(jì)算機(jī)報(bào);2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 姚火春;豬鏈球菌2型MRP的分子致病作用及16S～23S rDNA區(qū)間序列鑒定方法[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

2 馬愛梅;PGP和MRP在難治性癲癇耐藥機(jī)制中作用的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

3 趙東兵;大腸癌組織中端粒酶活性和直腸癌預(yù)后相關(guān)生物學(xué)標(biāo)志的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1998年

4 傅建民;原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中端粒酶活性及預(yù)后相關(guān)分子生物學(xué)標(biāo)志的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1998年

5 王曉芳;XIAP反義寡核苷酸誘導(dǎo)急性早幼粒白血病細(xì)胞系HL-60細(xì)胞凋亡及逆轉(zhuǎn)耐藥的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

6 楊志紅;新基因—代謝相關(guān)蛋白基因的克隆、功能研究及黃芪多糖對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞功能的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

7 趙鑫;肺腺癌A549紫杉醇耐藥細(xì)胞株建立以及新型紫杉烷類化合物多藥耐藥逆轉(zhuǎn)作用及機(jī)制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

8 夏靜;豬鏈球菌2型fbps基因突變株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 侯慧麗;SS2毒力因子EF/MRP在乳酸菌中的表達(dá)及其作為口服疫苗的研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

2 孟犁;MRPⅡ系統(tǒng)中關(guān)于銷售預(yù)測與MRP算法的研究[D];東北大學(xué);2008年

3 段純;豬鏈球菌2型免疫磁珠的制備及在SS2分離鑒定中的應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

4 李艷華;MRP和MRS在慢性腦缺血診斷中的應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2010年

5 田梅;基于擴(kuò)展有向圖的工作流建模及其在MRPⅡ中的應(yīng)用研究[D];成都理工大學(xué);2012年

6 謝富春;精益生產(chǎn)系統(tǒng)在科龍空調(diào)公司的應(yīng)用研究[D];中南大學(xué);2005年

7 孫欽平;海信集團(tuán)ERP系統(tǒng)的開發(fā)與應(yīng)用[D];山東大學(xué);2005年

8 吳麗麗;GSM頻率復(fù)用的研究[D];南京理工大學(xué);2005年

9 王海麗;SS2三種毒力相關(guān)蛋白的克隆、表達(dá)及MRP與EF單克隆抗體的制備[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

10 陳榮梅;中小汽車制造企業(yè)物流信息系統(tǒng)的分析與設(shè)計(jì)[D];南京林業(yè)大學(xué);2006年

本文編號(hào)：1630685