本文選題：約氏瘧原蟲　切入點(diǎn)：子孢子　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：蚊媒傳播的瘧疾是一種危害嚴(yán)重的熱帶傳染病,在全世界人群中具有很高的發(fā)病率和致死率。近年來瘧原蟲多藥抗性株的出現(xiàn)與迅速擴(kuò)散,以及蚊媒對(duì)殺蟲劑耐受性的增加,目前又無有效的抗瘧疫苗,給瘧疾防治工作帶來很大的困難。傳統(tǒng)方法已難于控制該病的流行,迫切需要為瘧疾的防治工作提供新的方法和手段。瘧疾是由蚊蟲叮咬而傳播,瘧原蟲子孢子一旦進(jìn)入血循環(huán),數(shù)分鐘后便隨血流跨過肝血竇枯否氏細(xì)胞(Kuppfer cell,KC)后主動(dòng)粘附、迅速侵入肝細(xì)胞,并進(jìn)行紅外期增殖,然后才侵入紅細(xì)胞,導(dǎo)致瘧疾的發(fā)作。子孢子侵入肝細(xì)胞是瘧疾感染的關(guān)鍵,而阻斷蟲體的侵入,即可防止瘧疾感染,紅外期阻斷疫苗旨在阻斷子孢子侵入宿主肝細(xì)胞,防止瘧原蟲紅內(nèi)期的發(fā)育,是瘧疾疫苗的重要組成部分。唾液腺子孢子感染性受發(fā)育調(diào)節(jié),正常情況下,中腸內(nèi)卵囊成熟后破裂,子孢子逸出,經(jīng)血淋巴移行到唾液腺后2 d,發(fā)育成為具有感染性的子孢子。因此研究瘧原蟲具有侵入肝細(xì)胞能力的唾液腺子孢子與不具侵入肝細(xì)胞能力的卵囊子孢子之間的差異分子具有重要意義。但現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)技術(shù)尚不支持從媒介蚊的中腸和唾液腺中分離獲得高純度、足量的子孢子,因此針對(duì)這個(gè)時(shí)期的研究工作存在較大難度。 已經(jīng)完成的惡性瘧原蟲、其媒介岡比亞按蚊和約氏瘧原蟲全基因組測(cè)序工作,以及其他種類瘧原蟲(間日瘧原蟲、伯氏瘧原蟲、諾氏瘧原蟲、雞瘧原蟲)大量基因組序列的獲得,為后續(xù)的瘧原蟲研究打下了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ),基因功能的分析和蛋白質(zhì)組學(xué)研究已成為后基因組時(shí)代的主要任務(wù)。通過對(duì)瘧原蟲子孢子肝細(xì)胞侵入相關(guān)的差異基因和蛋白的大量發(fā)現(xiàn)和鑒定,將有助于認(rèn)識(shí)瘧原蟲生長發(fā)育的分子機(jī)制,可為瘧疾的防治提供分子理論依據(jù),提供藥物和疫苗新的靶目標(biāo),為采取防治策略戰(zhàn)勝瘧疾打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。 因此本實(shí)驗(yàn)以斯氏按蚊-約氏瘧原蟲為模型,從基因和蛋白兩方面對(duì)子孢子侵入肝細(xì)胞相關(guān)分子進(jìn)行研究:一方面應(yīng)用差異顯示PCR (differential display RT-PCR, DD-PCR)技術(shù)篩選約氏瘧原蟲唾液腺和卵囊子孢子差異cDNA,經(jīng)比較分析后獲得唾液腺子孢子特有的差異序列,克隆至TA 載體,根據(jù)序列同源分析和功能預(yù)測(cè)結(jié)果,推測(cè)可能與子孢子侵入肝細(xì)胞相關(guān)的基因;另一方面采用二維凝膠電泳
[Abstract]:Mosquito-borne malaria is a highly harmful tropical infectious disease with high morbidity and mortality among people around the world. In recent years, the emergence and rapid spread of multidrug resistant strains of Plasmodium, as well as the increased resistance of mosquito vectors to insecticides, At present, there is no effective antimalarial vaccine, which poses great difficulties in malaria control. Traditional methods have become difficult to control the epidemic and there is an urgent need to provide new methods and means for malaria control. Malaria is transmitted by mosquito bites. Once the plasmodium sporozoites enter the blood circulation, after a few minutes with the blood flow across the hepatic sinusoidal Kuppfer cell Kuppfer cell (KCC), the plasmodium actively adheres, rapidly invades the hepatocyte, and carries on the infrared phase proliferation, then invades the red blood cell. It is the key of malaria infection that the sporozoite invades the liver cells, and blocking the invasion of the parasite can prevent the malaria infection. The infrared phase blocking vaccine is designed to prevent the sporozoite from invading the host liver cells and preventing the development of the erythroid phase of the malaria parasite. Salivary gland sporozoite infection is regulated by development. Normally, the oocysts in the midgut break down after maturation, and the sporozoites escape. Two days after the hemolymph migration to the salivary glands, they developed into infective sporozoites. Therefore, the difference between the salivary gland sporozoites with the ability to invade the liver cells and the oocystis with no ability to invade the hepatocytes was studied. Heteromolecules are of great significance, but existing experimental techniques do not support the isolation of high purity from the midgut and salivary glands of vector mosquitoes. Due to the sufficient number of sporozoites, it is difficult to do research on this period. The complete genome sequencing of Plasmodium falciparum, the vector Anopheles gambiae and Plasmodium yoelii, and other species of Plasmodium falciparum (Plasmodium vivax, Plasmodium berghei, Plasmodium falciparum), The acquisition of a large number of genomic sequences laid a solid foundation for further research on Plasmodium. The analysis of gene function and proteomics have become the main tasks in the post-genomic era. Through the discovery and identification of a large number of differential genes and proteins related to the invasion of plasmodium sporozoite liver cells, It will be helpful to understand the molecular mechanism of malaria parasite growth and development, to provide molecular theoretical basis for malaria control, to provide new targets for drugs and vaccines, and to lay a solid foundation for the adoption of control strategies to overcome malaria. So this experiment is based on the model of Anopheles stephens-Plasmodium yoelii. The gene and protein aspects of sporozoite invading hepatocyte related molecules were studied. On the one hand, PCR differential display RT-PCR (DD-PCR) technique was used to screen the differential cDNAbetween salivary gland and oocyst sporozoite of Plasmodium yoelii. After comparative analysis, the difference of cDNAs between salivary glands and oocysts of Plasmodium yoelii was obtained. Salivary gland sporozoite specific differential sequence, Cloning into TA vector, according to sequence homology analysis and functional prediction, we speculated that the gene may be related to the invasion of hepatocytes by sporozoite. On the other hand, two-dimensional gel electrophoresis was used.
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R383

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本文編號(hào)：1617291