本文選題：HIV-1　切入點(diǎn)：vpr　出處：《暨南大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 研究HIV-1 vpr基因編碼的病毒蛋白R(shí)(Viral protein R，Vpr)對(duì)CD4~+T淋巴細(xì)胞系C8166生物學(xué)行為的影響，為進(jìn)一步了解Vpr的功能和作用機(jī)制，及今后研究Vpr引起整個(gè)CD4~+T淋巴細(xì)胞蛋白組的漂移奠定基礎(chǔ)。 方法： 通過(guò)同源重組構(gòu)建重組腺病毒質(zhì)粒，用脂質(zhì)體法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至包裝細(xì)胞HEK293，獲得重組腺病毒Ad-vpr，熒光顯微鏡觀察Ad-vpr感染C8166細(xì)胞，Westernblotting鑒定Vpr在Ad-vpr感染的C8166細(xì)胞內(nèi)的特異性表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)等檢測(cè)Vpr對(duì)C8166細(xì)胞的細(xì)胞膜完整性，，細(xì)胞周期，凋亡等生物學(xué)行為的影響。透射電鏡、激光共聚焦顯微鏡觀察Vpr誘導(dǎo)的C8166細(xì)胞形態(tài)的改變。 結(jié)果： 構(gòu)建了重組腺病毒Ad-vpr，證實(shí)了Vpr在Ad-vpr感染的C8166細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，Annexin V-APC染色流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果表明；Ad-vpr感染48h后C8166細(xì)胞GFP~+細(xì)胞早期凋亡率與重組空載體感染組(Ad-vector組)相比無(wú)明顯差別；而Ad-vpr感染72h后，C8166 GFP~+細(xì)胞早期凋亡率顯著高于Ad-vector組。PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)膜完整性表明：Ad-vpr感染48h的C8166細(xì)胞與Ad-vector感染48h的C8166細(xì)胞相比，細(xì)胞膜完整性明顯不能維持。PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果顯示，培養(yǎng)48h的C8166細(xì)胞，Ad-vpr感染組晚期凋亡率及S期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)顯著高于Ad-vector組，而
[Abstract]:Objective:. To study the effect of HIV-1 vpr gene encoded virus protein rvpr) on the biological behavior of CD4T lymphocyte line C8166, and to lay a foundation for further understanding the function and mechanism of Vpr and for studying the drift of whole CD4T lymphocyte protein group induced by Vpr in the future. Methods:. The recombinant adenovirus plasmid was constructed by homologous recombination and transfected into the packaging cell line HEK293 by liposome method. The recombinant adenovirus Ad-vpra was obtained. The specific expression of Vpr in Ad-vpr infected C8166 cells was identified by Western blotting with fluorescence microscope. The effects of Vpr on cell membrane integrity, cell cycle and apoptosis of C8166 cells were detected by flow cytometry. The morphological changes of C8166 cells induced by Vpr were observed by transmission electron microscope and confocal laser microscope. Results:. The recombinant adenovirus Ad-vpr1 was constructed, and the expression of Vpr in Ad-vpr infected C8166 cells was confirmed by flow cytometry. The results of flow cytometry showed that the early apoptosis rate of C8166 cells infected by Ad-vpr was not significantly different from that of Ad-vector infected C8166 cells. However, the early apoptosis rate of C8166 GFP~ ~ cells infected with Ad-vpr was significantly higher than that of C8166 cells infected with Ad-vector for 48 h after infection with Ad-vector. The membrane integrity of C8166 cells infected with Ad-vpr was significantly higher than that of C8166 cells infected with Ad-vector for 48 h. The results of cell cycle analysis by flow cytometry showed that the late apoptosis rate and S phase percentage of C8166 cells infected with Ad-VPR for 48 h were significantly higher than those in Ad-vector group.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：1600125