本文選題：內(nèi)皮高表達(dá)脂多糖相關(guān)因子1　切入點(diǎn)：內(nèi)毒素　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：膿毒癥(sepsis)是多器官功能障礙(MODS)的前兆,是當(dāng)前危重病醫(yī)學(xué)面臨的難題之一,它也是導(dǎo)致嚴(yán)重?zé)齻�、�?chuàng)傷患者死亡的主要原因之一;其發(fā)病機(jī)制與內(nèi)毒素(LPS)激活血管內(nèi)皮細(xì)胞誘發(fā)并加重全身炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。膿毒癥的病理生理機(jī)制復(fù)雜,現(xiàn)行的治療措施有限,因此我們深入研究其發(fā)病機(jī)制就顯得尤為重要。 近年來,由于血管內(nèi)皮細(xì)胞是內(nèi)毒素作用的直接靶細(xì)胞之一,國內(nèi)外對LPS激活內(nèi)皮細(xì)胞的作用途徑、特異受體、胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面研究較多。本研究室前期應(yīng)用抑制消減雜交(SSH)和cDNA末端擴(kuò)增技術(shù)(RACE),從LPS刺激后的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中克隆到一個人類新基因全長cDNA序列,經(jīng)Northern blot驗證后作為人類新基因被GenBank全長序列庫所接受(No.AY074889)。因其在受LPS刺激的內(nèi)皮細(xì)胞中上調(diào)表達(dá),故暫時命名為內(nèi)皮高表達(dá)脂多糖相關(guān)因子1(endothelial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor 1,EOLA1)。 目前,國外尚無關(guān)于該基因的相關(guān)研究,本實驗室對EOLA1基因做了一些前期研究工作,并經(jīng)生物信息學(xué)分析顯示:該基因全長1404個bp,其定位于染色體Xq27.4,編碼蛋白由158個氨基酸組成,分子量17.89kDa,等電點(diǎn)6.43,親水性好,為可溶性蛋白。其二級結(jié)構(gòu)含α螺旋、β片層結(jié)構(gòu)和β轉(zhuǎn)角,并形成一個螺旋—轉(zhuǎn)角—螺旋(HTH)基序。EOLA1氨基酸序列包含N-糖基化位點(diǎn)、PKC磷酸化位點(diǎn)和酪氨酸激酶2磷酸化位點(diǎn)。 多組織Northern blot顯示EOLA1基因除在LPS刺激的內(nèi)皮細(xì)胞上調(diào)表達(dá)外,在骨胳肌、心臟、腎臟、肝臟和胎盤有較強(qiáng)的表達(dá),在結(jié)腸、小腸、脾臟有較弱的表達(dá),而在腦、胸腺、肺和外周白細(xì)胞則未見表達(dá)。在7種癌細(xì)胞株上,顯示在早幼粒白血病系HL-60、海拉細(xì)胞系S3、慢性骨髓性白血病系K-562和肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549都有表達(dá),而在成淋巴細(xì)胞瘤性白血病MOLT-4和結(jié)直腸腺癌SW480表達(dá)水平最高,但在黑素瘤G-361無表達(dá)。在經(jīng)過G418壓力篩選后的穩(wěn)定表達(dá)EGFP-EOLA1(enhanced green fluorescent protein-EOLA1)融合蛋白的ECV304細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)EOLA1蛋白為全細(xì)胞分布。酵母雙雜交顯示EOLA1蛋白與細(xì)胞內(nèi)金屬硫蛋白相互作用,可能參與細(xì)
[Abstract]:Sepsis (sepsis) is a precursor of multiple organ dysfunction (MODS) and one of the most difficult problems in critically ill medicine. It is also one of the main causes of death in patients with severe burns and trauma. Its pathogenesis is closely related to the activation of vascular endothelial cells (VEC) to induce and aggravate systemic inflammatory response. The pathophysiological mechanism of sepsis is complex and the current treatment measures are limited. Therefore, it is particularly important for us to study its pathogenesis in depth. In recent years, vascular endothelial cells (VECs) are one of the direct target cells of endotoxin, and the specific receptors for the activation of endothelial cells by LPS at home and abroad. We used suppression subtractive hybridization (SSH) and cDNA terminal amplification technique to clone a novel human cDNA sequence from human umbilical vein endothelial cells stimulated by LPS. As a novel human gene, Northern blot confirmed that it was accepted by the GenBank full-length sequence library no. AY074889. Because it was up-regulated in endothelial cells stimulated by LPS, it was temporarily named endothelial-overestimated lipopolysaccharide-associated factor 1EOLA1. At present, there is no related research on this gene in foreign countries. Our laboratory has done some preliminary research work on the EOLA1 gene. Bioinformatics analysis showed that the gene was 1404 BP, located on chromosome Xq27.4. the encoded protein was composed of 158 amino acids with molecular weight of 17.89 kDa, isoelectric point of 6.43 and good hydrophilicity. The secondary structure of the protein contains 偽 helix, 尾 lamellar structure and 尾 rotation angle, and forms a helico-turn-helix HTH) motif. EOLA1 amino acid sequence contains N-glycosylation site, PKC phosphorylation site and tyrosine kinase 2 phosphorylation site. Northern blot showed that the expression of EOLA1 gene was higher in skeletal muscle, heart, kidney, liver and placenta than in endothelial cells stimulated by LPS, and weakly expressed in colon, small intestine and spleen, but in brain and thymus. There was no expression in lung and peripheral leukocytes. In 7 kinds of cancer cell lines, HL-60, Haila cell line S3, K-562 and A549 were all expressed in promyelocytic leukemia cell line HL-60, Haila cell line S3, chronic myeloid leukemia cell line K-562 and lung cancer cell line A549. The expression of SW480 was the highest in lymphoblastic leukemia (LML) and colorectal adenocarcinoma (Colorectal adenocarcinoma). However, there was no expression of EOLA1 protein in melanoma G-361. The expression of EOLA1 protein was found to be a whole cell distribution in the ECV304 cell line with stable expression of EGFP-EOLA1(enhanced green fluorescent protein-EOLA1 fusion protein after G418 pressure screening. Yeast two-hybrid analysis showed that EOLA1 protein interacted with intracellular metallothionein. Possible participation
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R392

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本文編號：1593807