成體肝臟干細胞的體外分離、培養(yǎng)及鑒定
本文選題:肝癌 切入點:肝臟干細胞 出處:《吉林大學(xué)》2006年碩士論文 論文類型:學(xué)位論文
【摘要】:肝臟是人體生命的重要器官,具有合成與儲存養(yǎng)料,分泌膽汁,解毒和防御等維持生命活動所必需的多種生理功能。然而肝臟又極易受到多種物質(zhì)(如病毒、化學(xué)致癌劑)的損傷,一旦受到損傷或出現(xiàn)病變,將嚴重影響機體的功能,甚至威脅生命。因此,肝臟保護與肝臟再生的研究,具有非常重要的理論和實際意義。 目的:從成人肝癌的癌旁組織中分離及培養(yǎng)肝前體細胞-卵圓細胞。并確定卵圓細胞體外生長和定向分化的條件,為肝干細胞的深入研究奠定基礎(chǔ),最終建立成人肝臟干細胞系。 方法:首先將術(shù)中所取肝臟癌旁組織經(jīng)免疫熒光組織化學(xué)染色鑒定后證實癌旁組織中存在肝臟干細胞,同時進行體外細胞原代培養(yǎng),體外培養(yǎng)3周后,經(jīng)過免疫磁化分離,獲得C-kit+細胞,再次經(jīng)免疫熒光組織化學(xué)鑒定,證實體外分離純化的C-kit+細胞為肝臟前體細胞。 結(jié)果:術(shù)中所取癌旁組織經(jīng)免疫熒光組織化學(xué)染色后可見癌旁組織匯管區(qū)存在AFP及CK19雙陽性細胞,即卵圓細胞。并以癌旁組織作為肝臟干細胞的來源,體外原代培養(yǎng)3周后,可見細胞呈集落樣生長,傳代后細胞生長速度加快,呈簇狀生長。約傳代2-3代后,將細胞經(jīng)免疫磁化分離,獲得C-kit+細胞,再次經(jīng)免疫熒光組織化學(xué)染色,可見分離純化后的C-kit+細胞共同表達AFP及CK19,具備雙向分化潛能,即向成熟干細胞及膽管上皮細胞分化。
[Abstract]:The liver is an important organ of human life. It can synthesize and store nutrients, secrete bile, detoxify and defend vital activities. However, the liver is vulnerable to many kinds of substances (such as viruses). The damage of chemical carcinogens will seriously affect the function of the body and even threaten life once it is damaged or damaged. Therefore, the study of liver protection and liver regeneration has very important theoretical and practical significance. Objective: to isolate and culture liver precursor cells-oval cells from adjacent tissues of adult liver cancer, and to determine the conditions for the growth and directional differentiation of oval cells in vitro, so as to lay a foundation for the further study of liver stem cells. Finally, adult liver stem cell lines were established. Methods: liver stem cells were identified by immunofluorescence histochemical staining in the paracancerous tissues of the liver, and the primary cells were cultured in vitro at the same time. After 3 weeks of culture in vitro, the liver stem cells were separated by immunomagnetization. C-kit cells were obtained and identified by immunofluorescence histochemistry, which confirmed that the purified C-kit cells were liver progenitor cells in vitro. Results: AFP and CK19 double positive cells, i.e. oval cells, were found in the adjacent tissues after immunofluorescence histochemical staining. The paracancerous tissues were used as the source of hepatic stem cells and cultured in vitro for 3 weeks. It can be seen that the cells grow like colony, and the growth rate of the cells increases after passage. After about 2-3 passages, the C-kit cells are separated by immunomagnetic method, and then stained by immunofluorescence histochemistry. It can be seen that the purified C-kit cells co-express AFP and CK19, and have the potential to differentiate into mature stem cells and bile duct epithelial cells.
【學(xué)位授予單位】:吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2006
【分類號】:R329.2
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