本文選題：γδT細胞　切入點：惡性腫瘤　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學》2007年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： T淋巴細胞可按照其表達的T細胞抗原受體(TCR)的不同分為兩種:αβT淋巴細胞和_γδT淋巴細胞。其中_γδT淋巴細胞數(shù)量少,識別抗原廣泛且無MHC分子限制性,對自體、同種異體或異種腫瘤細胞均可顯示明顯的殺傷活性,因此,_γδT細胞作為過繼免疫治療的候選細胞引起了越來越多的國內(nèi)外學者的關(guān)注。但由于_γδT細胞在外周血及腫瘤組織中分布頻率較低(＜10%),從而造成分離純化的過程十分繁瑣。深入的_γδT細胞功能研究及其可能的臨床應用在很大程度上取決于該細胞亞群的有效分離與純化。在這一領(lǐng)域,人們做了很多有益的嘗試,其中本課題組建立的固相化抗TCR_γδ抗體選擇性擴增的方法可獲得高純度的_γδT細胞,并可使TCR的受體譜保持相對完整。為了將_γδT細胞真正用于臨床過繼免疫治療,有必要優(yōu)化其培養(yǎng)條件,力求獲得高純度大量的_γδT細胞。為此,本研究對_γδT細胞體外培養(yǎng)條件進行了摸索,以期獲得_γδT細胞體外培養(yǎng)的最佳條件,同時對其功能也進行了驗證性的研究,希望為_γδT細胞最終臨床應用奠定重要的實驗基礎(chǔ)和提供理論指導。本研究的主要研究內(nèi)容與結(jié)果如下: 1.過繼治療用_γδT細胞制品研究 參照國家藥品監(jiān)督管理局2003年3月22日頒布的《人體細胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導原則》(以下簡稱指導原則)的要求,對過繼治療用的_γδT細胞進行制劑制備程序規(guī)范化與標準化的研究。研究結(jié)果表明固相抗體法可在體外有效地擴增來自健康人和腫瘤病人PBMC的_γδT細胞。 2._γδT細胞制品安全性研究 主要包括急性毒性、過敏性、溶血性和局部刺激性等主要的、局部的、全身給藥相關(guān)的特殊安全性實驗及致瘤性檢測。研究結(jié)果表明_γδT細胞制品無明顯的毒、副反應,對過繼免疫治療的受者無致瘤性的危險。 3._γδT細胞制品有效性評價 通過表型鑒定、體外殺傷實驗檢測_γδT細胞生物學效力,驗證_γδT細胞對腫瘤的殺傷作用及合適的效靶細胞比例,尋找合適的靶腫瘤。實驗結(jié)果顯示,體外培養(yǎng)擴增的外周血_γδT細胞對多種組織來源的惡性腫瘤細胞系包括人胰腺癌細胞系PANC-1、人肺癌細胞系NCI-H520、人卵巢上皮癌細胞系SKOV3和淋巴瘤細胞系Daudi均有著較強的細胞毒作用,且隨著效靶比增高而有所增強。且外周血_γδT細胞對化療耐藥SKOV3也有著良好的體外殺傷作用,提示了_γδT細胞制劑在臨床治療上與化療配伍使用的可能。 4.動物體內(nèi)實驗 ①建立小鼠移植瘤模型,觀察體外擴增的免疫功能正常小鼠脾_γδT細胞過繼免疫治療效果;②建立裸鼠皮下腫瘤模型,觀察人_γδT細胞對腫瘤的治療效果及其與化療有無協(xié)同或拮抗作用;③建立人外周血PBMC免疫重建的SCID小鼠皮下腫瘤模型,模擬正常人體免疫環(huán)境,回輸人_γδT細胞,觀察治療效果。通過動物體內(nèi)實驗為制定臨床給藥方案提供依據(jù)。實驗結(jié)果顯示_γδT細胞對荷人肺癌細胞系NCI-H520細胞裸鼠、荷人卵巢癌細胞系SKOV3細胞裸鼠和SCID小鼠,均有良好的體內(nèi)抑瘤作用,其治療效果與劑量呈正相關(guān);_γδT細胞治療效果與抗癌藥物順鉑的療效相似。小鼠脾_γδT細胞對小鼠卵巢癌細胞系OV2944腫瘤也有較強的體內(nèi)抑瘤作用。 綜上所述,固相抗體法可以有效地擴增外周血_γδT細胞,且擴增方法簡便、安全、有效。體外擴增的外周血_γδT細胞對多種惡性腫瘤有著良好的體內(nèi)外殺傷效應。外周血_γδT細胞作為一種能夠簡便獲得足夠數(shù)量而且有效的效應細胞,有望在今后的過繼免疫治療中發(fā)揮作用。本研究結(jié)果為申報臨床Ⅰ期試驗提供了重要的臨床前研究資料。本研究突出的成果在于我們在實驗動物中首次發(fā)現(xiàn)過繼_γδT細胞治療實體腫瘤的效果與化療藥物(順鉑)接近。如果這一效果在臨床試驗中得到重復的話,將是T細胞過繼治療領(lǐng)域當中里程碑式的事件。
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【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R392

【引證文獻】

相關(guān)碩士學位論文 前1條

1 馬全林;肺癌患者γδT細胞及總T細胞的檢測及意義[D];山西醫(yī)科大學;2010年

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本文編號：1580091