本文選題：γδT細(xì)胞　切入點(diǎn)：惡性腫瘤　出處：《中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2007年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： T淋巴細(xì)胞可按照其表達(dá)的T細(xì)胞抗原受體(TCR)的不同分為兩種:αβT淋巴細(xì)胞和_γδT淋巴細(xì)胞。其中_γδT淋巴細(xì)胞數(shù)量少,識(shí)別抗原廣泛且無(wú)MHC分子限制性,對(duì)自體、同種異體或異種腫瘤細(xì)胞均可顯示明顯的殺傷活性,因此,_γδT細(xì)胞作為過(guò)繼免疫治療的候選細(xì)胞引起了越來(lái)越多的國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。但由于_γδT細(xì)胞在外周血及腫瘤組織中分布頻率較低(＜10%),從而造成分離純化的過(guò)程十分繁瑣。深入的_γδT細(xì)胞功能研究及其可能的臨床應(yīng)用在很大程度上取決于該細(xì)胞亞群的有效分離與純化。在這一領(lǐng)域,人們做了很多有益的嘗試,其中本課題組建立的固相化抗TCR_γδ抗體選擇性擴(kuò)增的方法可獲得高純度的_γδT細(xì)胞,并可使TCR的受體譜保持相對(duì)完整。為了將_γδT細(xì)胞真正用于臨床過(guò)繼免疫治療,有必要優(yōu)化其培養(yǎng)條件,力求獲得高純度大量的_γδT細(xì)胞。為此,本研究對(duì)_γδT細(xì)胞體外培養(yǎng)條件進(jìn)行了摸索,以期獲得_γδT細(xì)胞體外培養(yǎng)的最佳條件,同時(shí)對(duì)其功能也進(jìn)行了驗(yàn)證性的研究,希望為_(kāi)γδT細(xì)胞最終臨床應(yīng)用奠定重要的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和提供理論指導(dǎo)。本研究的主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下: 1.過(guò)繼治療用_γδT細(xì)胞制品研究 參照國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2003年3月22日頒布的《人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》(以下簡(jiǎn)稱指導(dǎo)原則)的要求,對(duì)過(guò)繼治療用的_γδT細(xì)胞進(jìn)行制劑制備程序規(guī)范化與標(biāo)準(zhǔn)化的研究。研究結(jié)果表明固相抗體法可在體外有效地?cái)U(kuò)增來(lái)自健康人和腫瘤病人PBMC的_γδT細(xì)胞。 2._γδT細(xì)胞制品安全性研究 主要包括急性毒性、過(guò)敏性、溶血性和局部刺激性等主要的、局部的、全身給藥相關(guān)的特殊安全性實(shí)驗(yàn)及致瘤性檢測(cè)。研究結(jié)果表明_γδT細(xì)胞制品無(wú)明顯的毒、副反應(yīng),對(duì)過(guò)繼免疫治療的受者無(wú)致瘤性的危險(xiǎn)。 3._γδT細(xì)胞制品有效性評(píng)價(jià) 通過(guò)表型鑒定、體外殺傷實(shí)驗(yàn)檢測(cè)_γδT細(xì)胞生物學(xué)效力,驗(yàn)證_γδT細(xì)胞對(duì)腫瘤的殺傷作用及合適的效靶細(xì)胞比例,尋找合適的靶腫瘤。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,體外培養(yǎng)擴(kuò)增的外周血_γδT細(xì)胞對(duì)多種組織來(lái)源的惡性腫瘤細(xì)胞系包括人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1、人肺癌細(xì)胞系NCI-H520、人卵巢上皮癌細(xì)胞系SKOV3和淋巴瘤細(xì)胞系Daudi均有著較強(qiáng)的細(xì)胞毒作用,且隨著效靶比增高而有所增強(qiáng)。且外周血_γδT細(xì)胞對(duì)化療耐藥SKOV3也有著良好的體外殺傷作用,提示了_γδT細(xì)胞制劑在臨床治療上與化療配伍使用的可能。 4.動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn) ①建立小鼠移植瘤模型,觀察體外擴(kuò)增的免疫功能正常小鼠脾_γδT細(xì)胞過(guò)繼免疫治療效果;②建立裸鼠皮下腫瘤模型,觀察人_γδT細(xì)胞對(duì)腫瘤的治療效果及其與化療有無(wú)協(xié)同或拮抗作用;③建立人外周血PBMC免疫重建的SCID小鼠皮下腫瘤模型,模擬正常人體免疫環(huán)境,回輸人_γδT細(xì)胞,觀察治療效果。通過(guò)動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)為制定臨床給藥方案提供依據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示_γδT細(xì)胞對(duì)荷人肺癌細(xì)胞系NCI-H520細(xì)胞裸鼠、荷人卵巢癌細(xì)胞系SKOV3細(xì)胞裸鼠和SCID小鼠,均有良好的體內(nèi)抑瘤作用,其治療效果與劑量呈正相關(guān);_γδT細(xì)胞治療效果與抗癌藥物順鉑的療效相似。小鼠脾_γδT細(xì)胞對(duì)小鼠卵巢癌細(xì)胞系OV2944腫瘤也有較強(qiáng)的體內(nèi)抑瘤作用。 綜上所述,固相抗體法可以有效地?cái)U(kuò)增外周血_γδT細(xì)胞,且擴(kuò)增方法簡(jiǎn)便、安全、有效。體外擴(kuò)增的外周血_γδT細(xì)胞對(duì)多種惡性腫瘤有著良好的體內(nèi)外殺傷效應(yīng)。外周血_γδT細(xì)胞作為一種能夠簡(jiǎn)便獲得足夠數(shù)量而且有效的效應(yīng)細(xì)胞,有望在今后的過(guò)繼免疫治療中發(fā)揮作用。本研究結(jié)果為申報(bào)臨床Ⅰ期試驗(yàn)提供了重要的臨床前研究資料。本研究突出的成果在于我們?cè)趯?shí)驗(yàn)動(dòng)物中首次發(fā)現(xiàn)過(guò)繼_γδT細(xì)胞治療實(shí)體腫瘤的效果與化療藥物(順鉑)接近。如果這一效果在臨床試驗(yàn)中得到重復(fù)的話,將是T細(xì)胞過(guò)繼治療領(lǐng)域當(dāng)中里程碑式的事件。
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【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R392

【引證文獻(xiàn)】

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1 馬全林;肺癌患者γδT細(xì)胞及總T細(xì)胞的檢測(cè)及意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：1580091