發(fā)布時間：2018-03-04 16:10

  本文選題：幽門　切入點：桿菌　出處：《浙江大學》2006年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景 流行病學資料表明,幽門螺桿菌(Hp)細胞毒素相關蛋白A(cytotoxin-associated protein A,CagA)與慢性活動性胃炎、消化性潰瘍和胃癌的發(fā)生密切相關。CagA蛋白由Hp疾病相關基因“cag致病島”編碼并通過特有的Ⅳ型分泌途徑進入宿主細胞,其C端谷氨酸-脯氨酸-異亮氨酸-酪氨酸-丙氨酸(EPIYA)基序中酪氨酸位點的磷酸化對其生物學功能的發(fā)揮至關重要。以往的研究已發(fā)現(xiàn),磷酸化的CagA通過與SHP-2結(jié)合,強烈干擾宿主細胞信號轉(zhuǎn)導通路,激活轉(zhuǎn)錄因子NF-κ B和AP-1,激活原癌基因c-fos和c-jun,導致細胞的增殖與分化。CagA與SHP-2的相互作用還會導致宿主肌動蛋白細胞骨架重構(gòu),使細胞的運動性和遷移能力增強。然而,CagA的致病機制至今仍不完全明確。從蛋白質(zhì)組角度整體性地研究CagA對宿主細胞的影響,將有助于對其致病機制的全面認識。表面增強的激光解析離子化-飛行時間-質(zhì)譜(surface-enhanced laser desorption/inionation-time of flight-mass spectra,SELDI-TOF-MS)技術(shù)可用于建立細胞特異的蛋白質(zhì)表達譜,分析不同生理或病理狀態(tài)下蛋白質(zhì)組的差異。相對于雙向電泳等傳統(tǒng)技術(shù),SELDI技術(shù)具有操作簡單上樣量少,高通量、高靈敏度、在低分子量范圍具有更好的分辨能力等優(yōu)勢,是分析細胞蛋白質(zhì)組的有力工具,已在腫瘤標志物的篩選和腫瘤的早期檢測中發(fā)揮了重要作用,在疾病機理研究領域也具有很好的應用前景。本研究采用SELDI技術(shù)研究CagA對胃上皮AGS細胞蛋白質(zhì)表達的影響,從而確定與CagA致病過程有關的小分子宿主細胞蛋白質(zhì),并分析蛋白質(zhì)表達差異與CagA磷酸化的相關性以及與CagA激活Erk/MAPK信號轉(zhuǎn)導通路的相關性。 方法 為研究CagA對AGS細胞蛋白質(zhì)表達的影響,我們用野生型cagA質(zhì)粒、磷酸化位點突變型cagA質(zhì)粒和空載體質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染AGS細胞,EGFP質(zhì)粒作為監(jiān)控轉(zhuǎn)染效率的對照。RT-PCR和測序驗證野生型及突變型cagA基因在對應組中的表達。用SELDI蛋白質(zhì)芯片系統(tǒng)分別對各組細胞蛋白進行結(jié)合與分析,得到各組特異的
[Abstract]:Research background. Epidemiological data showed that cytotoxin associated protein Acytotoxin-associated protein CagA and chronic active gastritis were associated with Helicobacter pylori. Peptic ulcer is closely related to gastric carcinogenesis. CagA protein is encoded by the HP disease-related gene "cag pathogenicity island" and enters host cells through a unique type 鈪，

本文編號：1566363