本文關(guān)鍵詞： 惡性瘧原蟲 瘧疾疫苗 單克隆抗體 基因工程 表位　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：瘧疾目前仍然是嚴重威脅人類健康的寄生蟲病,由于瘧原蟲抗藥性以及蚊媒抗殺蟲劑的抗性產(chǎn)生和迅速擴散,使瘧疾防治面臨嚴重困難。因此,研制有效的瘧疾疫苗已成為瘧疾防治的重要替代途徑。 在瘧原蟲復(fù)雜的生活史中,只有紅內(nèi)期原蟲是致病的階段,因此紅內(nèi)期疫苗的研究備受關(guān)注。惡性瘧原蟲裂殖子表面蛋白(Merozoite Surface Protein 1,MSP-1)C末端19KD片段(MSP1-19)和裂殖子頂端膜抗原1(AMA-1)是目前很有希望的紅內(nèi)期亞單位疫苗。我們實驗室已經(jīng)成功構(gòu)建了由MSP1-19和AMA-1的Ⅲ亞區(qū)[AMA-1(Ⅲ)]通過接點序列連接而成的融合蛋白PfCP-2.9,該疫苗已獲準進入臨床試驗,現(xiàn)已完成Ⅰ期臨床試驗。實驗表明:該蛋白具有比其單個組分MSP1-19和AMA-1(Ⅲ)更強的免疫原性,抗體滴度分別提高10倍和18倍。動物免疫血清在15%濃度時能完全抑制瘧原蟲生長,而單個組分免疫血清在此濃度時沒有任何抑制作用。此外,現(xiàn)場瘧疾病人血清與融合蛋白的免疫反應(yīng)性遠強于與單組分抗原的反應(yīng)性。這些結(jié)果表明MSP1-19和AMA-1(Ⅲ)融合后已明顯增強其免疫原性、免疫反應(yīng)性及體外抑制效率。 為探討PfCP-2.9融合抗原的免疫原性及抑制瘧原蟲生長效力提高的內(nèi)在原因,我們制備了一系列抗PfCP-2.9重組蛋白的單克隆抗體并對其生物學(xué)活性進行測定,目的在于尋找并發(fā)現(xiàn)可能存在于PfCP-2.9融合蛋白中的抑制性表位以及因兩個抗原成分相互作用而產(chǎn)生的新表位,通過對其功能與特性的分析,試圖闡明PfCP-2.9疫苗效力增強的內(nèi)在原因,為融合抗原疫苗的設(shè)計和完善提供依據(jù)和見解。 本研究以PfCP-2.9重組蛋白抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞SP2/O融合,經(jīng)過ELISA篩選和亞克隆培養(yǎng)共獲得20株抗PfCP-2.9的特異性單抗。ELISA和Western Blot檢測顯示20株單抗均能與PfCP-2.9特異性反應(yīng)。為測定這些單抗的特異性,我們制備了MSP1-19和AMA-1(Ⅲ)重組蛋白以及28肽連接區(qū)合成肽。特異性識別反應(yīng)的結(jié)果可將20株單抗分為三類:一類是識別PfCP-2.9和MSP1-19抗原;二類是識別PfCP-2.9和AMA-1(Ⅲ);三類是只識別PfCP-2.9抗原,沒有發(fā)現(xiàn)識別連接區(qū)蛋白的單抗。在20株單抗中共有11
[Abstract]:Malaria continues to be a serious threat to human health. Malaria control is facing serious difficulties due to the emergence and rapid spread of malaria parasite resistance and mosquito resistant insecticide resistance. The development of effective malaria vaccine has become an important alternative to malaria control. In the complex life cycle of Plasmodium, only the erythroid parasite is the stage of disease. Therefore, the study of erythrocyte vaccine has attracted much attention. The merozoite surface protein of Plasmodium falciparum, Merozoite Surface Protein 1, has been studied. MSP-1)C terminal 19KD fragment MSP1-19) and merozoite apical membrane antigen 1 AMA-1). Our laboratory has successfully constructed the 鈪，

本文編號：1473848