本文關(guān)鍵詞： 桑色素 T細(xì)胞 活化 增殖 凋亡 遲發(fā)型超敏反應(yīng) 巨噬細(xì)胞 膿毒癥 一氧化氮　出處：《暨南大學(xué)》2007年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的： 研究桑色素對(duì)T細(xì)胞行為和DNFB誘導(dǎo)的DTH、E. coli誘導(dǎo)的膿毒癥模型的影響，并探討其作用機(jī)制。 方法： 分別使用刀豆蛋白A(concanavalinA，ConA)和二丁酸佛波醇酯(phorbol 12，13-dibutyrate，PDB)加離子霉素(ionomycin，Ion)刺激小鼠淋巴結(jié)來(lái)源的T細(xì)胞活化和增殖，建立地塞米松誘導(dǎo)胸腺細(xì)胞凋亡模型。研究桑色素(morin)對(duì)上述刺激劑所誘導(dǎo)的T細(xì)胞行為的影響，以及對(duì)地塞米松誘導(dǎo)的胸腺細(xì)胞凋亡的影響。利用熒光標(biāo)記抗體檢測(cè)T細(xì)胞的表面分子，羧基熒光素二乙酸琥珀酰亞胺酯(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester，CFDA-SE)熒光染料檢測(cè)T細(xì)胞增殖，碘化丙錠(propidium iodide，PI)檢測(cè)T細(xì)胞周期，PI測(cè)定地塞米松(dexamethasone，Dex)誘導(dǎo)胸腺細(xì)胞凋亡的比率；建立二硝基氟苯(dinitrofluorobenzene，DNFB)誘導(dǎo)遲發(fā)型超敏反應(yīng)(delayed type hypersensitivity，DTH)模型，觀察morin對(duì)DTH模型小鼠耳組織腫脹、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度和胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的影響，光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠耳廓組織學(xué)變化，噻唑蘭(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法檢測(cè)淋巴結(jié)細(xì)胞和脾臟淋巴細(xì)胞增殖情況；建立腹腔注射大腸桿菌(escherichia coli, E. coli)誘導(dǎo)膿毒癥(sepsis)模型，觀察7天內(nèi)morin對(duì)小鼠存活率的影響，用Annexin-V／PI雙染法檢測(cè)淋巴細(xì)胞凋亡情況，Griess法檢測(cè)脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌一氧化氮(nitric oxide，NO)情況，熒光顯微鏡下觀察和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞吞噬情況。 結(jié)果： 1．終濃度為25、50和100μmol／L的morin均下調(diào)ConA刺激后的CD69~+T細(xì)胞的比率，其中，100μmol／L的morin抑制作用最強(qiáng)，下調(diào)比率為(48.95±0.81)％，與對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.01)。CFDA-SE染色分析顯示，各濃度的morin對(duì)ConA或PDB+Ion刺激48h或72 h的T細(xì)胞增殖，均具有明顯地抑制作用，以100μmol／L morin抑制作用最明顯。PI染色流式細(xì)胞術(shù)分析的結(jié)果表明，與ConA或PDB+Ion組相比，morin組中S期的細(xì)胞比率較高。PI染色分析小鼠胸腺細(xì)胞凋亡的結(jié)果表明，25μmol／L、50μmol／L 100μmol／L morin對(duì)Dex誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有促進(jìn)作用，100μmol／L morin作用最強(qiáng)，凋亡細(xì)胞比率為(42.10±3.06)％，與Dex組相比，差異顯著(P＜0.01)。 2．雙耳稱(chēng)重的結(jié)果顯示，morin(70 mg／ml)處理組與DTH組具有顯著的差異(P＜0.05)，能明顯抑制DNFB引起的炎癥反應(yīng)；耳廓局部組織學(xué)檢測(cè)也表明，morin能夠抑制DNFB誘導(dǎo)的DTH，明顯減少淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)。morin能降低DTH小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，抑制淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞(P＜0.01)和脾臟淋巴細(xì)胞的增殖(P＜0.05)。 3．morin(35 mg／ml)處理組sepsis小鼠長(zhǎng)期存活率高于sepsis組(P＜0.01)；Griess反應(yīng)檢測(cè)NO含量的結(jié)果顯示，各濃度組的morin均抑制LPS刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO，100μmol／L的morin抑制作用最強(qiáng)(P＜0.01)；皮下注射morin 10 mg／ml，，發(fā)現(xiàn)其對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能也有促進(jìn)作用(P＜0.05)，對(duì)淋巴細(xì)胞的凋亡影響輕微(P＞0.05)。 結(jié)論： 1．morin可顯著抑制ConA刺激的T細(xì)胞活化，對(duì)ConA或PDB+Ion誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖均有抑制作用；其對(duì)增殖的抑制作用主要表現(xiàn)為S期細(xì)胞的阻滯。對(duì)地塞米松誘導(dǎo)的胸腺細(xì)胞的凋亡有促進(jìn)作用。提示morin可能是一種有效的免疫抑制劑。 2．morin可顯著抑制DTH小鼠耳組織腫脹和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度，降低胸腺和脾臟指數(shù)，抑制淋巴細(xì)胞的增殖可能是其作用機(jī)制之一。 3．morin可延長(zhǎng)sepsis小鼠的存活率，morin體內(nèi)給藥可增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力，并且morin可抑制LPS誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌的NO。這些結(jié)果均表明morin能有效地防止和治療細(xì)菌性感染。
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【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R392;R459.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1467493