本文關(guān)鍵詞： 旋毛蟲 新生幼蟲 cDNA 文庫 p46 kDa 抗原 WN10 cDNA 克隆 表達 抗原性　出處：《吉林大學(xué)》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：旋毛蟲病是由旋毛蟲(Trichinella spiralis)引起的一種呈全球性分布的人獸共患寄生蟲病,嚴重威脅著人民群眾的身體健康。本研究利用分子生物學(xué)及免疫學(xué)技術(shù),分離新生幼蟲抗原基因,從而為旋毛蟲病診斷抗原及保護性抗原的篩選及大量制備奠定基礎(chǔ)。 以旋毛蟲感染豬血清為抗體探針,對旋毛蟲新生幼蟲cDNA文庫進行免疫篩選,從4×105個重組噬菌體中共獲得156個陽性噬菌斑。其中WN10 cDNA 編碼旋毛蟲新生幼蟲p46 kDa抗原,全長為1352 bp,含有1218bp完整的開放閱讀框,氨基酸序列第1-18位為信號肽。GenBank數(shù)據(jù)庫BlastN 同源性分析表明,與旋毛蟲Ts ORF9.10 (U88241) 同源性為99%(899/906)。研究表明此基因在旋毛蟲肌幼蟲、新生幼蟲、3日齡及5 日齡成蟲期均有表達。利用PCR 技術(shù), 從篩選得到的pBK-CMV-WN10重組質(zhì)粒中擴增到不含信號肽序列的WN10基因片段,重組到原核表達載體pET-28a中。用IPTG誘導(dǎo)培養(yǎng)重組表達菌,對表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE分析,結(jié)果顯示,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后重組菌體裂解產(chǎn)物與對照菌相比出現(xiàn)了1條相對分子量約為48 kDa的新條帶。 重組蛋白的抗原性分析表明,該重組抗原對小鼠產(chǎn)生了較好的免疫保護效果,其旋毛蟲腸道成蟲和肌幼蟲的減蟲率分別為64.28%和61.21%,說明重組抗原可誘導(dǎo)小鼠機體獲得較強的抗旋毛蟲攻擊感染的能力及產(chǎn)生抗旋毛蟲在肌肉組織中寄生的免疫保護作用。Western-blotting 檢測顯示,重組抗原可被旋毛蟲感染的豬血清、小鼠血清以及重組抗原免疫的小鼠血清識別,與ELISA 檢測結(jié)果一致,說明在旋毛蟲感染動物及重組抗原免疫后,可以刺激宿主免疫系統(tǒng)使其產(chǎn)生抗此抗原的特異性抗體應(yīng)答,重組抗原具有很好的抗原性,從而為旋毛蟲病診斷抗原及保護性抗原的篩選及大量制備奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Trichinella spiralis is a globally distributed zoonotic parasitic disease caused by Trichinella spiralis. It is a serious threat to the health of the people. In this study, the antigen genes of newborn larvae were isolated by molecular biology and immunology. Therefore, it will lay a foundation for the screening and preparation of diagnostic and protective antigens of trichinellosis. The cDNA library of newborn larvae of Trichinella spiralis was screened by using sera from pigs infected with Trichinella spiralis as antibody probe. A total of 156 positive plaque were obtained from 4 脳 105 recombinant phages, in which WN10 cDNA encoded p46 kDa antigen from newborn larvae of Trichinella spiralis, with a length of 1352bp. It contains 1218bp complete open reading frame, and the amino acid sequence 1-18 is the signal peptide. The BlastN homology analysis of GenBank database shows that. The homology of this gene with ts ORF9.10 U88241 was 9999 / 906. The results showed that the gene was found in muscle larvae and newborn larvae of Trichinella spiralis. The WN10 gene fragment without signal peptide sequence was amplified from the pBK-CMV-WN10 recombinant plasmid by PCR technique. Recombinant into prokaryotic expression vector pET-28a. The recombinant expression bacteria were induced by IPTG. The expression product was analyzed by SDS-PAGE. After induction by IPTG, a new band with a relative molecular weight of about 48 kDa was found in the recombinant cell lysis product compared with the control strain. The antigenicity analysis of the recombinant protein showed that the recombinant antigen had a good immune protection effect on mice, and the worm reduction rates of adult and muscle larvae of Trichinella spiralis were 64.28% and 61.21%, respectively. These results indicate that recombinant antigen can induce mice to acquire stronger ability to resist Trichinella spiralis attack infection and to produce anti-Trichinella spiralis parasitic immunity protection in muscle tissue. Western-blotting. The test showed. The recombinant antigen can be recognized by the pig serum infected by Trichinella spiralis, mouse serum and mouse serum immunized with recombinant antigen, which is consistent with the results of ELISA detection, indicating that after Trichinella spiralis infection and recombinant antigen immunization. It can stimulate the host immune system to produce a specific antibody response against this antigen, and the recombinant antigen has good antigenicity, thus laying a foundation for screening and preparing a large number of diagnostic and protective antigens for trichinellosis.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R392;Q78

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 何臣;李元廣;徐效峰;鐘定;;肺吸蟲病合并旋毛蟲病1例[J];廣東醫(yī)學(xué);2011年12期

2 馬軍莉;胡云衢;蒲志賢;付軒疑;閆玉文;;肥大細胞介導(dǎo)的ADCC效應(yīng)在抗旋毛蟲病免疫機理中的作用[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進展;2011年02期

3 苑淑賢;姚新華;任科研;李萌;楊金生;苑冬梅;李煜潔;常軍亮;楊淑蘋;;豬旋毛蟲病膠體金檢測試紙條的制備[J];中國生物制品學(xué)雜志;2011年08期

4 李潤花;高晉華;裴彥江;李起超;申金雁;殷國榮;;口服三苯雙脒不同療程抗小鼠旋毛蟲成囊期幼蟲的效果觀察[J];中國人獸共患病學(xué)報;2011年07期

5 錢海舟;阮強;郭鄂平;;理化因素對旋毛蟲感染性的研究進展[J];青島醫(yī)藥衛(wèi)生;2011年04期

6 朱紹綱;;肉品的衛(wèi)生與人畜共患的傳染病[J];食品與健康;2002年01期

7 阮強;錢海舟;郭鄂平;;不同濃度的鹽溶液及浸泡時間對旋毛蟲幼蟲囊包的影響[J];中國民康醫(yī)學(xué);2011年15期

8 王玉榮;;食源性寄生蟲病的類型及防治措施[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2011年15期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相關(guān)會議論文 前10條

1 劉明遠;;我國的旋毛蟲病及中歐合作研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2006學(xué)術(shù)年會論文集（上冊）[C];2006年

2 劉明遠;;我國的旋毛蟲病及中歐合作研究進展[A];全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

3 劉明遠;;我國的旋毛蟲病及中歐合作研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2006年

4 劉明遠;;我國的旋毛蟲病及最新研究概況[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)食品衛(wèi)生學(xué)分會成立20周年文集[C];2004年

5 吳秀萍;付寶權(quán);劉明遠;張亞蘭;原麗紅;李蓮瑞;P.Boireau;;旋毛蟲新生幼蟲cDNA文庫的免疫篩選[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

6 劉明遠;;我國的旋毛蟲病及最新研究概況[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

7 付寶權(quán);吳秀萍;劉明遠;張亞蘭;原麗紅;李蓮瑞;盧強;陳啟軍;P.Boireau;;旋毛蟲新生幼蟲p46 000抗原基因的克隆及序列分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

8 高長玲;付寶權(quán);劉明遠;原麗紅;吳秀萍;張亞蘭;李蓮瑞;盧強;陳啟軍;P.Boireau;;旋毛蟲新生幼蟲WN1抗原基因的克隆及表達[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

9 崔晶;王中全;;我國旋毛蟲病的流行趨勢及防制對策[A];全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

10 張再興;李雨春;孫院紅;杜尊偉;;我國人旋毛蟲病防治歷程及未來應(yīng)對策略[A];全國寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院北京熱帶醫(yī)學(xué)研究所所長、研究員甘紹伯，，副主任醫(yī)師馮曼玲;旋毛蟲病與吃生肉有關(guān)[N];健康報;2000年

2 消毒殺蟲科;你了解旋毛蟲病嗎[N];云南日報;2005年

3 記者邱爽;云南通報9例旋毛蟲病[N];保健時報;2009年

4 蘇揚;烤肉雖好吃 旋毛蟲病須防[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2006年

5 張永年;吃火鍋當(dāng)心感染旋毛蟲[N];大眾科技報;2008年

6 武漢市武東鐵路醫(yī)院門診部 余文慧主任;涮羊肉與旋毛蟲病[N];湖北科技報;2000年

7 故城縣里老中心醫(yī)院 張亞利;吃涮羊肉須防旋毛蟲病[N];河北科技報;2002年

8 記者 曾繁玉;旋毛蟲病研究獲重大進展[N];健康報;2001年

9 白毅;我國首獲旋毛蟲新基因[N];中國醫(yī)藥報;2005年

10 楊瑩丹 施廣德;街頭品嘗羊肉串 留神惹上旋毛蟲[N];健康報;2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 劉曉雷;旋毛蟲轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2012年

2 于申業(yè);高質(zhì)量基因重組蛋白在屠宰動物旋毛蟲病診斷中的應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2009年

3 白雪;旋毛蟲排泄分泌物調(diào)節(jié)巨噬細胞及成肌細胞功能的體外研究[D];吉林大學(xué);2011年

4 吳秀萍;旋毛蟲不同發(fā)育時期抗原基因的篩選與鑒定[D];吉林大學(xué);2009年

5 蔡亞南;旋毛蟲端粒DNA和TERT基因克隆及端粒酶活性測定[D];吉林大學(xué);2011年

6 蔡亞南;旋毛蟲端粒DNA和TERT基因克隆及端粒酶活性測定[D];吉林大學(xué);2011年

7 李靜;旋毛蟲感染小鼠腸道免疫應(yīng)答及菌群變化規(guī)律的研究[D];吉林大學(xué);2011年

8 牛廷獻;旋毛蟲新生幼蟲期特性基因的克隆、表達及抗原性研究[D];中國人民解放軍軍需大學(xué);2003年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊秀麗;旋毛蟲早期抗原基因診斷方法的建立[D];吉林大學(xué);2012年

2 王蕾;應(yīng)用shotgun技術(shù)對旋毛蟲侵入相關(guān)蛋白的初步篩選[D];鄭州大學(xué);2012年

3 王鴻盛;旋毛蟲p53抗原基因的克隆、表達及鑒定[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 杜婧;旋毛蟲腸期抗原基因的沙門氏菌運載體研究[D];吉林大學(xué);2012年

5 白瑪央宗;藏豬旋毛蟲流行病學(xué)情況調(diào)查及其分子分類鑒定[D];西藏大學(xué);2011年

6 劉麗麗;旋毛蟲與腸道微生物間相互作用的研究[D];吉林大學(xué);2011年

7 于艷玲;旋毛蟲早期識別性單克隆抗體的制備及鑒定[D];吉林大學(xué);2008年

8 徐冬梅;青海與河南部分地區(qū)豬旋毛蟲病流行病學(xué)調(diào)查及蟲種鑒定[D];鄭州大學(xué);2010年

9 原麗紅;旋毛蟲新生幼蟲編碼p46 kDa抗原基因的克隆、表達及抗原性分析[D];吉林大學(xué);2005年

10 孫家行;旋毛蟲抗BALB/c小鼠體內(nèi)C6膠質(zhì)瘤細胞作用的研究[D];吉林大學(xué);2008年

本文編號：1467527