本文關(guān)鍵詞： 組織因子途徑抑制物-2 克隆 表達(dá) 畢赤酵母　出處：《吉林大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 組織因子途徑抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2, TFPI-2)是最近發(fā)現(xiàn)的一種絲氨酸蛋白酶抑制劑。體外實驗發(fā)現(xiàn),TFPI-2可抑制纖溶酶、胰蛋白酶基質(zhì)、基質(zhì)金屬蛋白酶-1 (matrix metalloproteinase-1, MMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-1, MMP-3)、因子Ⅶa和組織因子復(fù)合物(FⅦa-TF)等多種蛋白酶,在維持細(xì)胞基質(zhì)重塑及血管生成、調(diào)控腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移、調(diào)節(jié)血液凝固及細(xì)胞凋亡等方面可能具有重要作用。 本研究從人新鮮肝組織總RNA中釣取tfpi-2 cDNA序列,利用基因重組技術(shù),構(gòu)建tfpi-2 cDNA克隆載體pMD18-T-tfpi-2及tfpi-2表達(dá)載體pPICZα-tfpi-2。將tfpi-2表達(dá)載體轉(zhuǎn)化畢赤酵母X-33,建立兼具原核系統(tǒng)良好操作性和真核系統(tǒng)后加工性的重組TFPI-2畢赤酵母真核表達(dá)體系。通過菌液PCR鑒定、SDS-PAGE和重組TFPI-2蛋白活性的篩選,篩選出高表達(dá)重組TFPI-2蛋白的酵母菌。將該轉(zhuǎn)化子表達(dá)出的蛋白進(jìn)行活性測定。結(jié)果表明,本研究正確克隆了tfpi-2 cDNA序列,構(gòu)建的重組TFPI-2畢赤酵母真核表達(dá)體系經(jīng)甲醇誘導(dǎo)可分泌具有胰蛋白酶抑制活性的重組TFPI-2蛋白,相對分子量為32kDa。TFPI-2的分泌表達(dá)在誘導(dǎo)第5天達(dá)峰值,為41750 TIU/L。國內(nèi)外文獻(xiàn)未見相關(guān)報道。本研究為基因工程方法生產(chǎn)TFPI-2藥物提供了實驗依據(jù)。
[Abstract]:Tissue factor pathway inhibitor-2 factor pathway inhibitor-2. TFPI-2 is a recently discovered serine protease inhibitor. In vitro, it was found that TFPI-2 can inhibit plasminolytic enzyme and trypsin matrix. Matrix metalloproteinase-1 (MMP-1). Matrix metalloproteinase-1 (MMP-3). Many proteases, such as factor 鈪，

本文編號：1450969