本文關(guān)鍵詞： 白念珠菌 菌絲相 酵母 PCR-RFLP ERG11 分泌性天冬氨酸蛋白酶 磷脂酶　出處：《暨南大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 1目的 比較白念珠菌菌絲相與酵母相ERG11基因及胞外水解酶活性之間的差異，擬為在體外對該菌進(jìn)行病原真菌學(xué)研究時選擇合適菌相提供理論依據(jù)。 2方法 將16株同一親本來源、對氟康唑敏感性不同的白念珠菌(CA-1、CA-2、……、CA-9、CA-11、CA-12、……、CA-17)進(jìn)行菌絲相與酵母相培養(yǎng)后，分別抽提基因組DNA，設(shè)計一對引物以PCR擴(kuò)增ERG11基因，純化后分別用AccⅠ、MunⅠ、AflⅡ消化，瓊脂糖凝膠電泳后比較兩相細(xì)胞RFLP圖譜；用下游引物對ERG11基因純化產(chǎn)物進(jìn)行反向測序；分別用牛血清白蛋白培養(yǎng)基(BSA)和卵黃瓊脂培養(yǎng)基(EYM)測定兩相細(xì)胞分泌性天冬氨酸蛋白酶活性(PA值)和磷脂酶活性(PZ值)，PA和PZ值等于菌落直徑與總直徑(菌落直徑+BSA上透明圈或EYM上白色沉淀圈)的比值，采用配對t檢驗對兩相細(xì)胞PA值和PZ值進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 3結(jié)果 3．1 AccⅠ、MunⅠ、AflⅡRFLP圖譜及基因測序結(jié)果均顯示菌株CA-7、CA-8、CA-14、CA-16、CA-17的菌絲相與酵母相ERG11基因間存在差異，，其余菌株(CA-1、CA-2、……、CA-6、CA-9、CA-11、CA-12、CA-13、CA-15)兩相間未見差異。 3．2 CA-7、CA-8、CA-14、CA-16和CA-17菌絲相與酵母相ERG11基因第1547位點(diǎn)、1587位點(diǎn)和1617位點(diǎn)的堿基存在差異，位點(diǎn)編號按照基因庫中ERG11基因序列編號(登錄號X13296)。 3．3白念珠菌菌絲相與酵母相分泌性天冬氨酸蛋白酶活性的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.980，P=0.000)，前者強(qiáng)于后者(PA均值分別為0.464、0.547)。 3．4白念珠菌菌絲相與酵母相分泌磷脂酶活性的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=5.867，P=0.000)，前者強(qiáng)于后者(PZ均值分別為0.543、0.606)。 4結(jié)論 4．1白念珠菌菌絲相與酵母相ERG11基因間存在差異。 4．2白念珠菌菌絲相與酵母相體外分泌性天冬氨酸蛋白酶和磷脂酶的活性存在差異。 4．3結(jié)合既往研究(白念珠菌菌絲相是該菌在體內(nèi)的主要致病形式)和本次實驗結(jié)果，認(rèn)為在進(jìn)行白念珠菌體外研究時，選用其菌絲相(而不是酵母相)更能反映體內(nèi)真實情況。
[Abstract]:1 purpose To compare the difference of ERG11 gene and extracellular hydrolase activity between mycelium phase and yeast phase of Candida albicans in order to provide theoretical basis for the selection of suitable phase in the study of pathogenic mycology of Candida albicans in vitro. 2 method Sixteen strains of Candida albicans with different sensitivity to fluconazole were collected from the same parent. CA-17) was cultured in hyphae phase and yeast phase, genomic DNAs were extracted, and a pair of primers were designed to amplify ERG11 gene by PCR. After purification, Acc 鈪

本文編號：1448443