本文關(guān)鍵詞： 日本血吸蟲 噬菌體展示cDNA文庫 成蟲 東方田鼠 親和淘洗　出處：《中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 日本血吸蟲病(Schistosomiasis japonica)是我國一種危害嚴(yán)重的人畜共患寄生蟲病。東方田鼠是迄今發(fā)現(xiàn)的唯一一種具有抗血吸蟲病作用的哺乳動(dòng)物。如能篩選、克隆出東方田鼠抗血吸蟲抗性相關(guān)的日本血吸蟲基因，可以為開發(fā)抗血吸蟲疫苗和治療藥物提供新技術(shù)、新思路。 噬菌體展示技術(shù)(phage display)是近年建立和發(fā)展起來的利用噬菌體融合表達(dá)外源基因的一項(xiàng)新技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于分子間識別機(jī)制的研究。本研究首次應(yīng)用T7噬菌體展示系統(tǒng)構(gòu)建了日本血吸蟲成蟲噬菌體展示cDNA文庫，并用東方田鼠陰性血清篩選該文庫，以期篩選到與東方田鼠抗血吸蟲抗性相關(guān)的日本血吸蟲基因。 方法與結(jié)果 1．日本血吸蟲成蟲噬菌體展示cDNA文庫的構(gòu)建：原始文庫的庫容量為4.98×10~6pfu，擴(kuò)增后文庫滴度為3.85x 10~(11)pfu／ml。對隨機(jī)挑取的96個(gè)噬菌斑進(jìn)行PCR鑒定，重組率為93.8％，其中95.6％的插入片段大于300 bp。7種特異性引物均能從文庫中釣取到日本血吸蟲成蟲相關(guān)基因。 2．東方田鼠抗血吸蟲抗性相關(guān)基因的篩選：分離東方田鼠陰性血清，用親和淘洗的方法篩選文庫。經(jīng)三輪篩選，，陽性克隆得到有效富集，共獲得10種目的基因的EST序列，其中7種與GenBank中登陸的日本血吸蟲基因序列具有高度相似性，相似性達(dá)到99％～100％；1種與其他物種基因有82％相似性，另外2種沒有發(fā)現(xiàn)顯著相似的基因。功能預(yù)測結(jié)果表明，部分EST編碼的蛋白或多肽分子功能主要是結(jié)合作用、酶活性及結(jié)構(gòu)蛋白。 結(jié)論本研究成功構(gòu)建了日本血吸蟲成蟲噬菌體展示cDNA文庫，并利用東方田鼠陰性血清成功篩選到10種目的基因的EST序列，為深入闡述東方田鼠抗血吸蟲分子機(jī)理和尋找新候選疫苗抗原分子奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Schistosomiasis japonica. It is a serious zoonotic parasitic disease in China. Microtus Fortis is the only mammal with anti-schistosomiasis effect found so far. The cloning of Schistosoma japonicum genes related to resistance to Schistosoma japonicum in Microtus Fortis could provide new techniques and new ideas for the development of anti-schistosomiasis vaccine and therapeutic drugs. Phage display is a new technique for expression of foreign genes by phage fusion. T7 phage display system was used for the first time to construct the cDNA library of adult Schistosoma japonicum phage display. The gene of Schistosoma japonicum related to resistance to Schistosoma japonicum was screened by the negative serum of Microtus orientalis. Methods and results 1. Construction of cDNA library of adult Schistosoma japonicum: the capacity of the original library is 4.98 脳 10 ~ (6) PFU. After amplification, the titer of the library was 3.85 x 10 ~ (10) p / ml. 96 randomly selected plaque were identified by PCR, and the recombinant rate was 93.8%. 95.6% of the inserted fragments were more than 300 bp.7 specific primers, all of which could catch the genes related to adult Schistosoma japonicum from the library. 2. Screening of genes related to resistance to Schistosoma japonicum in Microtus Orientalis: the negative sera were isolated and the library was screened by affinity washing method. After three rounds of screening, the positive clones were effectively enriched. A total of 10 EST sequences of target genes were obtained, of which 7 were highly similar to those of Schistosoma japonicum which landed in GenBank, and the similarity reached 99100. One had 82% similarities with other species genes, while the other two had no significant similarity. The functional prediction results showed that some of the protein or polypeptide functions encoded by EST were mainly binding. Enzyme activity and structural protein. Conclusion the phage display cDNA library of adult Schistosoma japonicum was successfully constructed, and the EST sequences of 10 target genes were successfully screened by using the negative serum of Microtus Fortis. It lays a foundation for further expounding the molecular mechanism of Schistosoma japonicum and searching for new vaccine antigen molecules.
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R383;Q78

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1447855