本文關(guān)鍵詞：人Man2cl基因表達(dá)對(duì)移植性腫瘤在小鼠的生長(zhǎng)及小鼠體液性免疫應(yīng)答的影響　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： MAN2C1是本實(shí)驗(yàn)室克隆的cDNA編碼的1個(gè)人α-甘露糖苷酶。我們?cè)确Q它為6A8α-甘露糖苷酶。國際已命名此酶為mannosidase，alpha，class 2C，member 1[Homo sapiens]，簡(jiǎn)稱MAN2C1。其相應(yīng)的基因位于染色體15q11-q13。HUGO基因命名委員會(huì)命名此基因?yàn)镸an2c1。MAN2C1的分子量在非糖基化情況下為116kDa。 為了在整體水平研究MAN2C1的生物學(xué)功能，本實(shí)驗(yàn)室用顯微注射線性pIRES2-EGFP-MAN2C1的方法，制備了轉(zhuǎn)Man2c1基因的ICR小鼠。本論文工作用基因組PCR的方法檢測(cè)Man2c1基因整合入小鼠基因組的情況。在113只原代小鼠中，共檢測(cè)到8只陽性小鼠。經(jīng)配對(duì)繁殖得到F1代小鼠�；蚪MPCR檢測(cè)見～1／2小鼠為陽性。陽性F1代小鼠合籠在F2代有～3／4小鼠陽性。F3代小鼠約有80％-90％的陽性。用RT-PCR檢測(cè)了Man2c1基因在轉(zhuǎn)基因鼠尾部組織中的轉(zhuǎn)錄，在7個(gè)系的小鼠中有4個(gè)為Man2c1 mRNA陽性。這表明，已成功制備了轉(zhuǎn)Man2c1基因小鼠。在35#轉(zhuǎn)基因小鼠觀測(cè)到毛稀疏的表型變化。本論文工作研究了Man2c1基因表達(dá)對(duì)移植性腫瘤生長(zhǎng)及對(duì)體液性免疫的影響。在小鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)中，觀察到轉(zhuǎn)基因小鼠的腫瘤生長(zhǎng)明顯快于非轉(zhuǎn)基因小鼠，且腫瘤在前者呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，并有引流淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，，而在后者，大部分腫瘤有完整的包膜，也無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。這表明轉(zhuǎn)入的Man2c1基因表達(dá)促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。在對(duì)相關(guān)機(jī)制的探索中，觀察到轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞中的NK細(xì)胞百分率增高，但脾臟單個(gè)核細(xì)胞對(duì)YAC-1細(xì)胞的殺傷無變化。在體液性免疫實(shí)驗(yàn)中，小鼠用BSA免疫，見轉(zhuǎn)基因小鼠的脾臟大于非轉(zhuǎn)基因小鼠，但血清抗BSA抗體的滴度卻低于非轉(zhuǎn)基因鼠。 為進(jìn)一步了解MAN2C1的生物學(xué)意義，本論文工作還藉RNAi技術(shù)抑制小鼠NIH-3T3細(xì)胞的Man2c1基因表達(dá)，探索了Man2c1基因表達(dá)對(duì)細(xì)胞在培養(yǎng)中生長(zhǎng)的影響。但未見陽性結(jié)果。
[Abstract]:MAN2C1 is a human 偽 -mannosidase encoded by cDNA in our laboratory. We originally called it 6A8 偽 -mannosidase. It has been named mannosidase internationally. Alpha,class 2C,member 1. [Homo sapiens]. The corresponding gene is located on chromosome 15q11-q13.HUGO gene nomenclature committee named this gene because the molecular weight of Man2c1.MAN2C1 is in the non-glycosylation condition. Under the condition of 116kDa. In order to study the biological function of MAN2C1 at the whole level, the microinjection of linear pIRES2-EGFP-MAN2C1 was used in our laboratory. ICR mice with Man2c1 gene were prepared. In this paper, the integration of Man2c1 gene into mouse genome was detected by genomic PCR. A total of 8 positive mice were detected. F1 generation mice were obtained by paired breeding. Genomic PCR analysis showed that 1 / 2 / 2 mice were positive. About 80% to 90% of the mice were positive. RT-PCR was used to detect the transcription of Man2c1 gene in the tail tissue of transgenic mice. Four of the 7 strains were Man2c1 mRNA positive. Transgenic mice with Man2c1 gene have been successfully prepared. The phenotypic changes of hair sparsity were observed in 3 transgenic mice. In this paper, the effect of Man2c1 gene expression on the growth of transplanted tumors and on humoral properties was studied. Immune effects. In mice tumor-bearing experiments. It was observed that the tumor growth of transgenic mice was much faster than that of non-transgenic mice, and the tumor had infiltrative growth and lymph node metastasis in the former, while in the latter, most of the tumors had complete capsule. There was also no lymph node metastasis, which indicated that the Man2c1 gene expression promoted tumor growth. In the exploration of the related mechanism, the percentage of NK cells in splenic mononuclear cells of transgenic mice was increased. In humoral immunity test, mice were immunized with BSA, and the spleen of transgenic mice was larger than that of non-transgenic mice. But the titer of serum anti-BSA antibody was lower than that of non-transgenic mice. In order to further understand the biological significance of MAN2C1, the expression of Man2c1 gene in mouse NIH-3T3 cells was inhibited by RNAi technique. The effect of Man2c1 gene expression on cell growth was explored, but no positive results were found.
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R392;R73-3

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本文編號(hào)：1437816