本文關(guān)鍵詞：過表達Akt1對小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)功能的影響　出處：《生物醫(yī)學(xué)工程與臨床》2014年04期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的探討Akt1過表達對小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)生物學(xué)功能的影響。方法雄性健康C57小鼠,鼠齡7~8周,體質(zhì)量18~25 g。取該小鼠脛骨和股骨,利用BMSCs的貼壁生長能力進行分離,并對獲取的細(xì)胞進行流式鑒定。構(gòu)建Akt1-IRES-GFP逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,感染BMSCs,并篩選、擴增Akt1過表達的BMSCs。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、Western blot測定轉(zhuǎn)染Akt1表達情況。用不同濃度(0、10、50、100 ng/mL)的γ干擾素(IFN-γ)處理Akt1-BMSCs及BMSCs,采用四唑氮化合物(MTS)法繪制生長曲線,通過Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白/碘化丙啶(AnnexinV/PI)復(fù)染,觀察不同濃度IFN-γ對Akt1-BMSCs及GFP-BMSCs細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果成功培養(yǎng)出小鼠BMSCs,高表達CD29、CD44、Sca-1,而不表達CD45、CD34,CD11b、CD31、FLK-1、MHC-Ⅱ。成功篩選并擴增出Akt1-BMSCs;RT-PCR顯示,Akt1-BMSCs的Akt1基因表達量明顯高于BMSCs(P0.01);Western blot顯示,Akt1-BMSCs的總Akt1蛋白及磷酸化Akt蛋白均高于BMSCs。流式細(xì)胞儀檢測Akt1-BMSCs及GFP-BMSCs的綠色熒光蛋白(GFP)的表達量均高于95%。細(xì)胞增殖及凋亡實驗顯示,在正常培養(yǎng)及高濃度IFN-γ(100 ng/mL)的刺激下,Akt1-BMSCs顯示出了增殖及抗凋亡優(yōu)勢。結(jié)論 Akt1-BMSCs比相同代數(shù)的BMSCs在正常培養(yǎng)及高濃度IFN-γ(100 ng/mL)的刺激下增殖及抗凋亡能力增強,可用于進行下一步的研究。
[Abstract]:Objective to investigate the expression of Akt1 on mouse bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) on biological function. Methods healthy male C57 mice, mice 7~8 weeks old, weighing 18~25 g. from the tibia and femur of mice, using BMSCs adherent growth ability were isolated, and the cells were analyzed by flow cytometry to construct. Akt1-IRES-GFP retroviral vector, BMSCs infection, and screening, amplification of Akt1 over expression of BMSCs. reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR), Western blot was determined by the expression of Akt1. (0,10,50100 ng/mL) with different concentrations of interferon gamma (IFN- gamma) Akt1-BMSCs and BMSCs, with four of nitrogen (MTS) growth curve drawing method and through the Ca2+ dependent phospholipid binding protein / propidium iodide (AnnexinV/PI) staining, observe the effects of different concentrations of IFN- on Akt1-BMSCs and GFP-BMSCs cell apoptosis. Results the successful cultivation of a high expression of CD29 in BMSCs mice. CD44, Sca-1, and CD34, the expression of CD45, CD11b, CD31, FLK-1, MHC- II. Successful screened and amplified Akt1-BMSCs Akt1 gene; RT-PCR showed that the expression of Akt1-BMSCs was significantly higher than that of BMSCs (P0.01); Western blot, green fluorescent protein Akt1-BMSCs Akt1 protein and phosphorylated Akt protein were higher than that of BMSCs. detection of Akt1-BMSCs and GFP-BMSCs by flow cytometry (GFP) expression were higher than that cell proliferation and apoptosis in experimental 95%., in normal culture and high concentration of IFN- (100 ng/mL) under the stimulation of Akt1-BMSCs showed proliferation and anti apoptosis. Conclusion Akt1-BMSCs is the same as the algebra of BMSCs in normal and high culture the concentration of IFN- gamma (100 ng/mL) enhanced the stimulation of proliferation and anti apoptosis ability, can be used for the next research.

【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所·血液病醫(yī)院;
【基金】：天津市應(yīng)用基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計劃(重點項目)(14JCZDJC33000)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemorrowmesenchymalste-m cells,BMSCs)是一種存在于骨髓、脂肪、臍帶血等組織的成體干細(xì)胞。BMSCs具有成脂、成骨、成軟骨[1~3]、免疫調(diào)節(jié)[4]和組織修復(fù)等多種功能。Akt1基因居PI3K/Akt1信號傳導(dǎo)通路核心部位,Akt1參與介導(dǎo)細(xì)胞生長、增殖等,其既是細(xì)胞存

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