本文關(guān)鍵詞：畢赤酵母表達gp96-scFv抗體及生物活性測定　出處：《生物工程學報》2014年04期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：旨在利用畢赤酵母分泌表達gp96-scFv抗體,純化后得到能特異性結(jié)合gp96抗原的小分子抗體片段(scFv)。根據(jù)gp96-scFv抗體基因序列,合成gp96-scFv抗體基因序列,將gp96-scFv抗體序列克隆到畢赤酵母表達質(zhì)粒pPICZα-A,線性化的重組表達載體電轉(zhuǎn)化到畢赤酵母X33,甲醇誘導目的蛋白表達,通過親和層析法純化目的蛋白,并以SDS-PAGE和Western blotting進行鑒定。通過Western blotting、Immunofluorescence、ELISA、FACS方法對gp96-scFv抗體的生物活性進行了檢測。結(jié)果成功地構(gòu)建了分泌表達抗gp96蛋白scFv抗體的畢赤酵母菌,每升畢赤酵母菌培養(yǎng)上清經(jīng)純化可獲約50 mg gp96-scFv抗體,所獲抗體其分子量大約為15 kDa,具有與gp96抗原特異性結(jié)合的活性。本研究通過畢赤酵母菌成功表達了gp96-scFv抗體,生物活性Western blotting、Immunofluorescence、ELISA、FACS分析表明該抗體能特異性結(jié)合gp96。
[Abstract]:The aim of this study was to express gp96-scFv antibody by Pichia pastoris. After purification, a small molecular antibody fragment was obtained, which could specifically bind to gp96 antigen. According to the gp96-scFv antibody gene sequence, the gp96-scFv antibody gene sequence was synthesized. The gp96-scFv antibody sequence was cloned into Pichia pastoris expression plasmid pPICZ 偽 -A. the linearized recombinant expression vector was transformed into Pichia pastoris X33, and the target protein was induced by methanol. The target protein was purified by affinity chromatography and identified by SDS-PAGE and Western blotting. The protein was identified by Western blotting. Immunofluorescence,ELISA. The bioactivity of gp96-scFv antibody was detected by FACS. Results Pichia pastoris which secreted anti-#en2# protein scFv antibody was successfully constructed. About 50 mg gp96-scFv antibody was obtained for each liter of culture supernatant of Pichia pastoris, and the molecular weight of the antibody was about 15 kDa. In this study, gp96-scFv antibody and bioactivity Western blotting were successfully expressed by Pichia pastoris. FACS analysis showed that the antibody could specifically bind to gp96.
【作者單位】： 新疆農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院;中國科學院微生物研究所中國科學院病原微生物與免疫學重點實驗室;中國科學院大學;
【基金】：北京自然科學基金(No.KQA201105260010A) 深圳市科技創(chuàng)新委員會項目(No.CYC201012290024A)資助~~
【分類號】：Q78;R392
【正文快照】： gp96是存在于真核生物細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中分子量約為96 kDa的熱休克蛋白(又稱GRP94)[1]。它屬于HSP90家族,是胞質(zhì)HSP90的旁系同源蛋白,約占細胞總蛋白的1%,在細胞各種代謝功能中都起著重要的作用[2]。gp96具有結(jié)合多肽的能力,因而在抗原加工、呈遞中發(fā)揮重要作用。內(nèi)源性或外源性抗

【參考文獻】

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