本文關(guān)鍵詞：人精子蛋白ERp57的功能研究　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2007年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】： 男性不育是目前日趨嚴(yán)重的生殖問(wèn)題，而且目前的一些輔助生殖技術(shù)存在著成功率低的問(wèn)題，所以近年來(lái)，很多研究都著重于尋找受精相關(guān)的候選蛋白從而能預(yù)測(cè)這些輔助生殖技術(shù)的成功率。本實(shí)驗(yàn)室為了識(shí)別這些候選蛋白，在前期工作中，通過(guò)二維電泳和質(zhì)譜的方法建立了人睪丸蛋白質(zhì)譜系。在這個(gè)譜系中共鑒定出979個(gè)點(diǎn)對(duì)應(yīng)于541種蛋白質(zhì)。ERp57就是其中的一個(gè)蛋白質(zhì)。ERp57屬于蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶家族，在體細(xì)胞中主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，，主要功能是對(duì)新合成的蛋白進(jìn)行重折疊。在小鼠精子中，已證實(shí)ERp57定位于精子赤道部，在精卵融合過(guò)程中起著重要的作用。本研究著重探討ERp57在人精子中的定位與功能，從而預(yù)測(cè)其在臨床上的應(yīng)用。首先western blot證實(shí)ERp57在人睪丸和人精子中確有表達(dá)，免疫組化顯示ERp57定位于人睪丸的初級(jí)精母細(xì)胞以上的各級(jí)生精細(xì)胞胞質(zhì)以及間質(zhì)細(xì)胞中，但在Sertoli細(xì)胞中表達(dá)較弱。用二維電泳與質(zhì)譜的方法鑒定出在人精子獲能前后ERp57發(fā)生了修飾形式的變化。而通過(guò)凝集素?zé)晒馊旧C實(shí)ERp57抗體對(duì)A23187誘導(dǎo)的精子頂體反應(yīng)無(wú)作用。在體外，用人精子穿去透明帶倉(cāng)鼠卵實(shí)驗(yàn)證實(shí)抗ERp57的抗體能抑制人精子穿倉(cāng)鼠卵，并且這種抑制效果呈現(xiàn)抗體濃度的依賴(lài)性。通過(guò)對(duì)臨床收集的IVF患者的精子標(biāo)本的分析，發(fā)現(xiàn)IVF成功(受精率＞60％)患者精子中ERp57含量與正常人精子標(biāo)本中的含量之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而IVF失敗(受精率＜60％)患者精子中ERp57量與前兩者比較都明顯降低并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。總之，ERp57這個(gè)蛋白是人精子頂體蛋白的組分，它在精卵相互作用中起著重要的作用。通過(guò)臨床研究提示ERp57可能成為男性不育的一個(gè)新的分子標(biāo)記，并且有望成為篩選患者進(jìn)行IVF治療的指標(biāo)。
[Abstract]:Male infertility is an increasingly serious reproductive problem, and some of the current assisted reproductive technology has a low success rate, so in recent years. Many studies have focused on finding fertilisation-related candidate proteins that can predict the success rate of these assisted reproductive techniques. The human testis protein lineage was established by two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry. A total of 979 sites corresponding to 541 proteins. ERp57 is one of the proteins. ERp5. 7 belongs to the protein disulfide isomerase family. In somatic cells, mainly expressed in the cytoplasmic reticulum, the main function is to refolding the newly synthesized protein. In mouse spermatozoa, it has been confirmed that ERp57 is located in the equatorial part of sperm. ERp57 plays an important role in the process of spermatozoa fusion. This study focuses on the localization and function of ERp57 in human spermatozoa. In order to predict its clinical application, western blot confirmed the expression of ERp57 in human testis and human spermatozoa. Immunohistochemical staining showed that ERp57 was located in the cytoplasm and interstitial cells of spermatogenic cells above primary spermatocytes in human testis. However, the expression of ERp57 was weak in Sertoli cells. The modified form of ERp57 was identified by two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry before and after human sperm capacitation. ERp was confirmed by agglutinin fluorescence staining. 57 antibody had no effect on sperm acrosome reaction induced by A23187 in vitro. The experiment of human spermatozoa piercing zona-free hamster egg confirmed that the antibody against ERp57 could inhibit human sperm from passing through hamster egg. And the inhibitory effect was concentration-dependent. The sperm samples collected from IVF patients were analyzed. It was found that there was no significant difference between the content of ERp57 in spermatozoa of patients with IVF success (fertilization rate > 60) and that of normal sperm samples. However, the amount of ERp57 in spermatozoa of patients with IVF failure (fertilization rate < 60) was significantly lower than that of the former. In short, the protein of ERp57 is a component of acrosome protein in human spermatozoa. It plays an important role in spermatozoa interaction. Clinical studies suggest that ERp57 may be a new molecular marker for male infertility and may be a potential marker for screening patients for IVF therapy.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R321

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本文編號(hào)：1406354