本文關(guān)鍵詞：布魯氏菌強毒株16M和疫苗株M5-90誘導巨噬細胞凋亡線粒體途徑相關(guān)因子的表達比較　出處：《中國病原生物學雜志》2014年03期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的比較布魯氏菌強毒株16M和疫苗株M5-90侵染小鼠巨噬細胞RAW264.7后其凋亡相關(guān)因子的轉(zhuǎn)錄和表達。方法建立16M、M5-90侵染RAW264.7模型,采用CFU計數(shù)法比較16M、M5-90侵染RAW264.7 4、8、12、24h后的胞內(nèi)生存情況;采用qRT-PCR檢測AIF、Bcl-2、Bax、Apaf-1、Bcl-xl基因轉(zhuǎn)錄水平的變化;采用ELISA檢測TNF-α和Cyt C在細胞內(nèi)的表達;采用激光共聚焦檢測Cyt C在細胞內(nèi)共定位表達情況。結(jié)果布魯氏菌16M在侵染后4h~24h胞內(nèi)CFU呈增多趨勢,而M5-90CFU先增多后減少。qRT-PCR顯示AIF基因的轉(zhuǎn)錄水平在侵染后4h~24h內(nèi)呈上升趨勢,且M5-90侵染組與16M侵染組比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);由M5-90侵染誘導的Apaf-1基因轉(zhuǎn)錄水平與16M侵染組比較有統(tǒng)計學意義(P0.05);Bcl-xl的轉(zhuǎn)錄量隨著侵染時間增長而不斷增加,且16M誘導組與M5-90組比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);M5-90侵染組Bax和Bcl-2水平與16M組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P均0.05);M5-90侵染組Bax/Bcl-2比值與16M侵染組比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。ELISA分析顯示TNF-α、Cyt C分泌量隨著時間增長而增加,且M5-90誘導組與16M組比較差異無統(tǒng)計學意義(P均0.05)。激光共聚焦顯示Cyt C定位在RAW264.7內(nèi),屬于胞漿表達,且M5-90誘導的表達量與16M組比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),并隨感染時間的延長不斷增加。結(jié)論布魯氏菌疫苗株M5-90侵染RAW264.7 4h~24h內(nèi),凋亡相關(guān)因子Cyt C、AIF、Bax/Bcl-2、Apaf-1的表達量高于強毒株16M侵染組,而Bcl-xl則相反,表明在此侵染階段M5-90具有更強的促細胞凋亡作用。
[Abstract]:Objective to compare the transcription and expression of apoptosis-related factors in murine macrophages (RAW264.7) infected by brucella virulent strain 16M and vaccine strain M5-90. Methods 16M was established. The RAW264.7 model infected with M5-90 was used to compare the intracellular survival of 16MN M5-90 infected with RAW264.7 4 (812m) by CFU counting method. QRT-PCR was used to detect the changes of Bcl-xl gene transcription level in AIF-Bcl-2BaxAX. The expression of TNF- 偽 and Cyt C in cells was detected by ELISA. The expression of Cyt C in cells was detected by confocal laser. Results the intracellular CFU of Brucella 16M increased at 4 h and 24 h after infection. However, M5-90 CFU increased first, then decreased. QRT-PCR showed that the transcription level of AIF gene increased within 24 hours after infection. There was no significant difference between M5-90 infection group and 16m infection group (P 0.05). The transcriptional level of Apaf-1 gene induced by M5-90 infection was significantly higher than that of 16M infection group (P 0.05). The transcription amount of Bcl-xl increased with the time of infection, and there was no significant difference between 16M induction group and M5-90 group. The levels of Bax and Bcl-2 in M5-90 infected group were significantly higher than those in 16M group (P < 0.05). There was no significant difference in Bax/Bcl-2 ratio between M5-90 infection group and 16M infection group. Elisa analysis showed that TNF- 偽. The secretion of Cyt C increased with time. There was no significant difference between M5-90 induction group and 16M group (P < 0.05). Laser confocal focus showed that Cyt C was located in RAW264.7 and belonged to cytoplasmic expression. The expression of M5-90 was not significantly different from that of 16M group (P 0.05). Conclusion Brucella vaccine strain M5-90 infects RAW264.7 for 4 h within 24 hours, and the apoptosis-related factor Cyt Con AIF is increased with the prolongation of infection time. The expression of Bax-Bcl-2 Apaf-1 was higher than that of 16M virulent strain, but Bcl-xl was the opposite, which indicated that M5-90 had a stronger apoptotic effect at this infection stage.
【作者單位】： 石河子大學動物科技學院;莎車縣農(nóng)業(yè)局;石河子大學醫(yī)學院病原生物學與免疫學教研室;
【基金】：國家科技支撐計劃項目(No.2013BAI05B05) 國際科技合作項目(No.2013DFA32380) 國家自然科學基金項目(No.31260596)
【分類號】：R378.5
【正文快照】： 布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的一種慢性傳染病[1],可導致人發(fā)生波浪熱、心內(nèi)膜炎、關(guān)節(jié)炎和骨髓炎等癥狀[2],在動物可引起流產(chǎn)和不育[3]。布魯氏菌能夠長期在宿主巨噬細胞內(nèi)生存和增殖,并逃避巨噬細胞的殺傷作用[4]。細胞的凋亡是胞內(nèi)病原菌生存的關(guān)鍵機制[5],布魯氏菌抑制巨

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：1406331