發(fā)布時(shí)間：2018-01-08 20:21

  本文關(guān)鍵詞：陽(yáng)性表達(dá)E-鈣粘蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞—細(xì)胞粘附對(duì)PTEN的調(diào)控及其分子機(jī)制研究　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2007年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： E-鈣粘蛋白 PTEN 蛋白酶體 蛋白質(zhì)降解 catenin 細(xì)胞間粘附

【摘要】： E-鈣粘蛋白是表皮細(xì)胞中一類(lèi)重要的細(xì)胞粘附分子。它的主要功能是介導(dǎo)細(xì)胞-細(xì)胞間的粘附連接,同時(shí)也參與傳遞細(xì)胞間的通訊。E-鈣粘蛋白在腫瘤的發(fā)生進(jìn)展中也起重要作用,它的失表達(dá)會(huì)導(dǎo)致腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移等惡性轉(zhuǎn)化及早期增殖速度的加快等,因此被認(rèn)為是個(gè)重要的“抑癌因子”。細(xì)胞膜上的E-鈣粘蛋白二聚體在相互識(shí)別結(jié)合時(shí),會(huì)傳遞信號(hào)給胞內(nèi)的信號(hào)通路比如PI3K/Akt信號(hào)通路。PTEN是PI3K/Akt通路中的負(fù)性調(diào)控因子,它可以拮抗PI3K的活性,在抑制細(xì)胞增殖、遷移、侵襲以及誘導(dǎo)凋亡等方面都發(fā)揮了重要作用,但是PTEN的調(diào)控研究還很不充分。因此,本課題旨在研究E-鈣粘蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞粘附所激活的信號(hào)通路與PI3K/Akt信號(hào)通路的“串話(huà)”,尋找其對(duì)PTEN是否存在調(diào)控,并探討其分子機(jī)制。 在實(shí)驗(yàn)中,我們首先在完全缺失E-鈣粘蛋白表達(dá)的乳腺癌MDA-MB-435細(xì)胞中建立了E-鈣粘蛋白表達(dá)的模型,并證明了E-鈣粘蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞-細(xì)胞間粘附在此模型中得到了部分的恢復(fù)。MTT增殖實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)表達(dá)E-鈣粘蛋白的乳腺癌細(xì)胞的增殖速度減慢。探究其原因,證實(shí)并非與β-catenin的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄活性有關(guān),而是由于細(xì)胞周期蛋白cyclin D1及其抑制因子p27受調(diào)控引起的細(xì)胞周期阻滯。我們還發(fā)現(xiàn),在E-鈣粘蛋白表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞中,PI3K/Akt信號(hào)通路亦受到了調(diào)控:磷脂酶PTEN的蛋白表達(dá)水平明顯升高,且Akt的磷酸化水平大大降低。 為了探討PTEN蛋白升高的原因,E-鈣粘蛋白表達(dá)株與對(duì)照株中的PTEN的轉(zhuǎn)錄水平首先進(jìn)行了對(duì)比,發(fā)現(xiàn)PTEN的mRNA與啟動(dòng)子活性在這兩株細(xì)胞中均并沒(méi)有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異,說(shuō)明此E-鈣粘蛋白的表達(dá)對(duì)PTEN的轉(zhuǎn)錄并沒(méi)有太大影響。接著,對(duì)PTEN的蛋白穩(wěn)定性的研究發(fā)現(xiàn),E-鈣粘蛋白表達(dá)可以延長(zhǎng)PTEN的半衰期,增加PTEN的穩(wěn)定性,表明E-鈣粘蛋白表達(dá)可以在翻譯后水平上調(diào)PTEN的表達(dá)。最后,進(jìn)一步證實(shí)了是蛋白酶體途徑而非溶酶體途徑參與了MDA-MB-435細(xì)胞中PTEN的降解,E-鈣粘蛋白表達(dá)延遲了蛋白酶體依賴(lài)的PTEN降解,PTEN的泛素化水平降低。 進(jìn)一步的研究證實(shí),E-鈣粘蛋白和PTEN在表達(dá)了E-鈣粘蛋白的MDA-MB-435細(xì)胞內(nèi)存在共定位和相互作用。缺失與β-catenin結(jié)合能力的E-鈣粘蛋白缺失株也能上調(diào)PTEN的表達(dá),但是利用RNA干擾技術(shù)降低細(xì)胞中的β-catenin表達(dá)后,PTEN的上調(diào)也有部分減弱,說(shuō)明β-catenin參與了E-鈣粘蛋白對(duì)PTEN的調(diào)控,但此調(diào)控可能不是通過(guò)E-鈣粘蛋白與β-catenin的直接結(jié)合實(shí)現(xiàn)的。另外,我們還證實(shí)了,此調(diào)控是細(xì)胞-細(xì)胞粘附依賴(lài)的,且并非存在于所有的細(xì)胞類(lèi)型中。 綜上所述,E-鈣粘蛋白的表達(dá)在MDA-MB-435細(xì)胞中上調(diào)了PTEN蛋白的表達(dá),且這種上調(diào)并非是發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平,而是細(xì)胞-細(xì)胞粘附依賴(lài)的,并通過(guò)E-鈣粘蛋白與PTEN的間接的蛋白-蛋白相互作用,影響了蛋白酶體介導(dǎo)的PTEN蛋白的降解途徑,提高了PTEN的穩(wěn)定性實(shí)現(xiàn)的。
[Abstract]:E- cadherin is an important class of cell adhesion molecules in epithelial cells. Its main function is to mediate cell-cell adhesion, and is also involved in the transfer of intercellular communication.E- cadherin also plays an important role in tumor development and progression, expression may lead to tumor invasion and its loss, metastasis of malignant transformation and in the early stage of cell proliferation, so it is considered to be an important tumor suppressor factor. The cell membrane of E- cadherin two dimer in the binding, will send signals to the cytoplasmic signaling pathways such as PI3K/Akt pathway.PTEN is a negative regulatory factor in PI3K/Akt pathway, it can antagonize PI3K the activity in inhibiting cell proliferation, migration, invasion and apoptosis plays an important role, but the research on the regulation of PTEN is still not sufficient. Therefore, the purpose of this paper is to study Bai Jiedao E- calcium sticky eggs Cell adhesion activated signaling pathway and PI3K/Akt signaling pathway, to find the "crosstalk" the existence of PTEN regulation, and explore its molecular mechanism.
In the experiment, we first breast cancer cell MDA-MB-435 expression in the complete absence of E- cadherin in established E- cadherin expression model, and prove that E- cadherin mediated cell-cell adhesion in this model has been part of the recovery of.MTT proliferation were found the expression of E- cadherin in breast cancer cell proliferation rate. Investigate its reason, confirmed that the nuclear transcription activity is not with beta -catenin, but because of cyclin cyclin D1 and its inhibitor p27 regulated by cell cycle arrest. We also found that the expression of E- calcium sticky protein in breast cancer cells, PI3K/Akt signaling pathway has been regulated expression of phospholipase PTEN protein increased significantly, and the level of Akt phosphorylation decreased greatly.
In order to investigate the cause of PTEN protein increased, the transcription level of E- cadherin expression lines and the control lines of PTEN were first compared, found that the difference of PTEN and mRNA promoter activity in these two cell lines were not statistically significant, indicating the transcriptional expression of E- cadherin on PTEN and not too big effect. Then, the research on the stability of PTEN protein found that E- cadherin expression can prolong the half-life of PTEN, increase the stability of PTEN, showed that E- can up regulate the expression of E-cadherin expression in PTEN translation. Finally, further proved that the proteasome pathway and non lysosomal pathway involved in the degradation of PTEN in MDA-MB-435 cells E-, E-cadherin expression delayed PTEN proteasome dependent degradation and ubiquitination level of PTEN decreased.
Further studies showed that E- and PTEN expression in the presence of cadherin co localization and interaction of E- cadherin MDA-MB-435 cells. Deletion and beta -catenin binding ability of E- cadherin mutant can upregulate the expression of PTEN, but using RNA interference technology to reduce the expression of beta -catenin, upregulation of PTEN also attenuated and that -catenin is involved in the regulation of cadherin E- beta on PTEN, but this regulation may be not the E- cadherin and beta -catenin binding directly. In addition, we also confirmed that this is the regulation of cell-cell adhesion dependent, and is not found in all cell types.
In summary, the expression of E- cadherin upregulated the expression of PTEN protein in MDA-MB-435 cells, which was not occurred at the transcriptional level, but cell-cell adhesion dependent, and through E- and PTEN cadherin indirect protein-protein interaction, the effect of proteasome degradation pathways mediated by PTEN protein, improve the realization of the stability of the PTEN.

【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R341

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1398542