本文關(guān)鍵詞：血管內(nèi)皮細(xì)胞原代培養(yǎng)及CXCL16對其影響的實驗研究　出處：《昆明醫(yī)學(xué)院》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：探討建立一種簡易、有效、重復(fù)性好的大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)和體外擴增方法，及進(jìn)行細(xì)胞鑒定、生物學(xué)特性分析，提供實驗手段；研究探討CXCL16對體外培養(yǎng)的鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞生長的影響。方法：1．大鼠主動脈“植塊”培養(yǎng)法分離培養(yǎng)大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞，采用偶聯(lián)了PECAM抗體的順磁玻珠對內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行活性篩選、細(xì)胞純化，并測定細(xì)胞生長率，繪制生長曲線；通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)及內(nèi)皮細(xì)胞第Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫熒光法進(jìn)行內(nèi)皮細(xì)胞鑒定。2．取2～3代大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞，接種密度為6×10~3細(xì)胞在96孔培養(yǎng)板上加入僅有1％FBS的M199培養(yǎng)液培養(yǎng)24h；然后每10孔(n=10)添加含不同濃度CXCL16(CXC chemokine ligand 16，CXC亞族第16號趨化因子)(OnM，0.01nM，0.1nM，1nM，10nM)孵育48h；及含10ng／mL堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor bFGF)孵育48h后用WST-1法進(jìn)行細(xì)胞增殖的測定。結(jié)果：1．培養(yǎng)的大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞(Rat aortic endothelial cells，RAECs)呈短梭形或多邊形，呈鵝卵石鑲嵌排列；ECs植入三維基質(zhì)膠(Matrigel)并在血清或生長因子的刺激下可形成毛細(xì)血管樣微管；免疫熒光法檢測Ⅷ因子相關(guān)抗原在胞漿中呈顆粒熒光顆粒，即呈陽性反應(yīng)。2．WST-1法檢測CXCL16(OnM，，0.01nM，0.1nM，1nM，10nM)及含10ng／mL bFGF孵育48h后細(xì)胞的吸光率(absorbance)((?)±s)分別為：0.413±0.004、0.502±0.006、0.540±0.008、0.573±0.006、0.525±0.009、1.023±0.004。CXCL16 0.1～10nM各劑量組與空白對照組比較有顯著差異(P＜0.05)，并在濃度為1nM時，所測定的吸光率達(dá)到最大值；10ng／ml的bFGF組與空白對照組比較明顯升高(P＜0.01)。結(jié)論：1．成功建立了一種簡易、有效、重復(fù)性好的鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)方法，為后續(xù)實驗奠定基礎(chǔ)。2．CXCL16具有促進(jìn)ECs增殖的功能，它除了趨化因子外，還是一種血管新生因子。在RAECs的體外培養(yǎng)系統(tǒng)中，CXCL16能誘導(dǎo)ECs的增生。然而CXCL16誘導(dǎo)ECs增生的具體機制，及與感染性心內(nèi)膜炎、風(fēng)濕性心瓣膜病、動脈粥樣硬化性心瓣膜病的關(guān)
[Abstract]:Objective : To study the effect of CXCL16 on the growth of rat aortic endothelial cells cultured in vitro by establishing a simple , effective and reproducible rat aortic endothelial cell separation culture and in vitro amplification method , and investigating the effect of CXCL16 on the growth of rat aortic endothelial cells cultured in vitro . Rat aortic endothelial cells were isolated and cultured in vitro . The endothelial cells were isolated and purified by paramagnetic beads coupled with PECAM antibody . The cell growth rate was measured and the growth curve was drawn . The endothelial cells were identified by cell morphology and endothelial cell factor 鈪

本文編號：1398301