本文關鍵詞：增強人α防御素3殺菌效率的研究　出處：《上海交通大學》2007年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】： 人α防御素3是由30個氨基酸組成的多肽,富含精氨酸,分子內(nèi)有3個二硫鍵�，F(xiàn)有研究表明人α防御素3能殺滅革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌和包被病毒(enveloped virus),但前體蛋白質的殺菌功能不明顯。我們用反轉錄-PCR方法從人白細胞總RNAs擴增出人α防御素3前體的編碼序列,克隆到pDEST17表達載體,表達不同結構的人α防御素3蛋白。與前人報道的結果一致,(1)人α防御素3原前體蛋白質(pre-proHNP-31-94),即94個氨基酸組成的多肽,殺菌活性很弱;刪除內(nèi)質網(wǎng)插入的信號肽(第1-19個氨基酸)的α防御素3前體(proHNP-320-94)也不具備殺菌功能;(3)只有成熟的α防御素3(HNP-365-94)能有效地殺滅細菌。非常有興趣的是,各種構型的人α防御素3,包括原前體蛋白(pre-proHNP-31-94)、前體蛋白質(proHNP-31-94)、以及成熟蛋白質(HNP-365-94)與N-端His6序列的融合都增強了蛋白質的殺菌作用。不能殺菌的原前體和前體能夠有效殺菌,其分子當量的殺菌功能弱于沒有His6標簽的成熟蛋白質。用生物學軟件進行分子模擬的結果指出His6序列并不改變蛋白質的整體結構,但能夠將蛋白質的等電點向堿性漂移,增加了蛋白質的正電性。這種電荷的改變可能是蛋白質殺菌功能提高的分子基礎�；谶@些研究,我們認為簡單增加堿性氨基酸殘基就可能制造出抗菌效率更高防御素。
[Abstract]:Human defensin 3 is a polypeptide composed of 30 amino acid, arginine rich, intramolecular 3 two disulfide bonds. The existing research shows that human alpha defensin 3 can kill gram positive bacteria, gram negative bacteria, fungi and enveloped virus (enveloped virus), but not a precursor protein with bactericidal function obviously. We use the method of reverse transcription -PCR from human leucocyte RNAs amplified the encoding sequence of human defensin 3 precursor, cloned into pDEST17 expression vector and expression of human alpha 3 protein structure in different defense. Results are consistent with previous reports, (1) human alpha defensin 3 pretrypsinogen egg white quality (pre-proHNP-31-94), namely polypeptide of 94 amino acids, the bactericidal activity is very weak; deleted signal peptide inserted into the endoplasmic reticulum (1-19 amino acids) of alpha defensin 3 precursor (proHNP-320-94) does not have the function of sterilization; (3) only 3 mature defense alpha (HNP-365-94) can effectively kill bacteria. Interestingly, human alpha 3 defense in various configurations, including the original precursor protein (pre-proHNP-31-94), precursor protein (proHNP-31-94), and mature protein (HNP-365-94) and fusion N- end His6 sequences both enhanced the bactericidal effect of protein. The original precursor cannot sterilization and precursor can effectively sterilize the molecular equivalent bactericidal function is weaker than the mature protein without His6 tag. The results of molecular simulation were pointed out by biology software His6 sequence does not change the overall structure of the protein, but the isoelectric point of the protein to alkaline drift, increased the positively charged proteins. This charge change may be the molecular basis of protein to improve the sterilization function. Based on these studies, we believe that a simple increase in basic amino acid residues could produce high antimicrobial activity of defensins.

【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R341

【共引文獻】

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本文編號：1398103