本文關(guān)鍵詞：戊肝病毒基因ORF2片段在大腸桿菌中的表達(dá)　出處：《長(zhǎng)春理工大學(xué)》2007年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：本實(shí)驗(yàn)主要研究戊肝抗原蛋白基因在大腸桿菌中優(yōu)化表達(dá)的方法，，以期獲得具有免疫原性的戊肝抗原蛋白，為戊肝基因工程疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。 首先采用氯化鈣法將克隆有戊肝抗原蛋白基因的質(zhì)粒載體pTO-T7-E轉(zhuǎn)化導(dǎo)入大腸桿菌BL21(DE3)中。對(duì)經(jīng)卡那霉素抗性篩選出的單克隆菌落擴(kuò)增培養(yǎng)后，提取質(zhì)粒，通過(guò)酶切和PCR法進(jìn)行鑒定，確定轉(zhuǎn)化菌。然后分別在25℃、30℃、37℃條件下對(duì)篩選出的轉(zhuǎn)化菌培養(yǎng)，以1mmol／L IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，超聲裂解菌體，SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)目的蛋白，蛋白印跡分析目的蛋白的免疫原性。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳顯示：在37℃條件下經(jīng)IPTG誘導(dǎo)的菌體中可見(jiàn)分子量約21KDa的重組蛋白，與理論值相符。表達(dá)產(chǎn)物主要以包涵體形式存在于胞內(nèi)。蛋白印跡分析表明：該目的蛋白具有免疫原性。
[Abstract]:The aim of this study was to optimize the expression of hepatitis E antigen protein gene in E. coli in order to obtain the immunogenicity of hepatitis E antigen protein and lay a foundation for the study of hepatitis E gene engineering vaccine. Firstly, the plasmid vector pTO-T7-E containing hepatitis E antigen protein gene was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) by calcium chloride method. After amplification and culture of monoclonal colonies screened by kanamycin resistance. The plasmids were extracted and identified by enzyme digestion and PCR. The transformed bacteria were cultured at 25 鈩

本文編號(hào)：1396663