本文關(guān)鍵詞：運(yùn)用T7噬菌體展示技術(shù)篩選乙型肝炎病毒PreS1相互作用蛋白的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 第一部分 乙型肝炎病毒PreS1融合蛋白的表達(dá)、純化及性質(zhì)鑒定 目的:構(gòu)建含乙型肝炎病毒(HBV)PreS1基因的原核表達(dá)載體并在大腸桿菌中高效表達(dá),獲得純化的PreS1融合蛋白,并對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行鑒定,為進(jìn)一步從人肝細(xì)胞cDNA表達(dá)文庫中篩選PreS1相互作用蛋白奠定基礎(chǔ)。 方法:采用PCR法擴(kuò)增含HindⅢ與XbaⅠ酶切位點(diǎn)的PreS1基因片段,原核表達(dá)載體pGST-MOLUC及PCR產(chǎn)物經(jīng)雙酶切后,用T4DNA連接酶將兩者連接并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌JM109構(gòu)建并篩選重組質(zhì)粒。隨后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入表達(dá)宿主菌BL21感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),對(duì)表達(dá)蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳分析和Western-blot檢測(cè)。以谷胱甘肽-Sepharose 4B凝膠為填料進(jìn)一步采用親和層析純化融合蛋白。 結(jié)果:用PCR方法擴(kuò)增出與預(yù)期大小一致的目的基因片段。重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切鑒定及測(cè)序分析證實(shí)重組質(zhì)�？寺〕晒�,命名為pGST PreS1。轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌后成功誘導(dǎo)出分子量為37kD的GST -PreS1融合蛋白,與預(yù)期分子量相符,誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白約占總菌蛋白的10%左右。Western-blot檢測(cè)表明誘導(dǎo)表達(dá)的融合蛋白能分別與抗GST的
[Abstract]:Part one Expression, purification and characterization of PreS1 Fusion protein of Hepatitis B virus Objective: to construct a prokaryotic expression vector containing HBV preS1 gene and express it in Escherichia coli to obtain the purified PreS1 fusion protein and to identify its properties. The results provide a basis for further screening of PreS1 interacting proteins from human hepatocyte cDNA expression library. Methods: the PreS1 gene fragment containing the restriction sites of Hind 鈪，

本文編號(hào)：1388098