本文關(guān)鍵詞：Ubiquitin真核表達(dá)載體構(gòu)建及在293T細(xì)胞中的表達(dá)　出處：《石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2014年04期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：為構(gòu)建泛素分子pcDNA3.1-Myc-ubiquitin真核表達(dá)載體,實(shí)現(xiàn)其在293T細(xì)胞中表達(dá)。采用人工合成ubiquitin基因序列并加入c-Myc標(biāo)簽序列及EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位點(diǎn)的方法,克隆至pcDNA3.1真核表達(dá)載體中。重組表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)PCR和測(cè)序鑒定正確后,脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染入293T細(xì)胞。Western blot和間接免疫熒光法分析重組質(zhì)粒在細(xì)胞中的蛋白表達(dá)及定位情況。菌落PCR及測(cè)序等分析結(jié)果顯示:成功構(gòu)建了pcDNA3.1-Myc-ubiquitin真核表達(dá)載體。免疫熒光和Western-Blot結(jié)果顯示:Myc-ubiquitin重組表達(dá)質(zhì)粒在293T細(xì)胞中獲得高效表達(dá)且蛋白定位于胞漿。由此可知,成功構(gòu)建pcDNA3.1-Myc-ubiquitin融合表達(dá)載體并在293T細(xì)胞中高效表達(dá),為課題組進(jìn)一步探討與泛素化修飾相關(guān)的neuritin的作用機(jī)制及功能奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:To construct eukaryotic expression vector of ubiquitin molecule pcDNA3.1-Myc-ubiquitin. The method of synthesizing ubiquitin gene sequence and adding c-Myc tag sequence as well as EcoR 鈪，

本文編號(hào)：1372212