本文關(guān)鍵詞：Ⅱ型肺上皮細(xì)胞表達(dá)Cre重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠的建立　出處：《中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：Ⅱ型肺上皮細(xì)胞能夠合成和分泌肺表面活性物質(zhì)(pulmonary surfactant,PS),調(diào)控肺的功能并與肺損傷后的修復(fù)有關(guān)。很多肺相關(guān)疾病的發(fā)生伴隨有Ⅱ型肺上皮細(xì)胞功能不全及PS系統(tǒng)缺陷。然而Ⅱ型肺上皮細(xì)胞在肺的發(fā)育、機(jī)體免疫及疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的具體功能尚不明確,對(duì)調(diào)控Ⅱ型肺上皮細(xì)胞功能的遺傳機(jī)制也知之甚少。 為了利用Cre-LoxP系統(tǒng)研究調(diào)節(jié)Ⅱ型肺上皮細(xì)胞功能的遺傳機(jī)制,我們研制了表面活性蛋白(SP-A)啟動(dòng)子指導(dǎo)Cre重組酶基因在轉(zhuǎn)基因小鼠Ⅱ型肺上皮細(xì)胞中表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠。構(gòu)建了含有表面活性蛋白A(SP-A)啟動(dòng)子、Cre重組酶基因和人生長(zhǎng)激素基因polyA的轉(zhuǎn)基因載體pSP-A-Cre。通過(guò)顯微注射將線性化的轉(zhuǎn)基因載體引入小鼠808枚受精卵中,其中729枚移植入36只假孕母鼠的輸卵管中使其發(fā)育,共獲得子代小鼠133只。經(jīng)PCR和Southern檢測(cè)鑒定出11只在基因組上整合有Cre重組酶基因的小鼠。將整合有Cre重組酶基因的首建者小鼠與Smad4條件基因打靶小鼠及ROSA26報(bào)告小鼠交配,利用基因組PCR和LacZ染色檢測(cè)Cre重組酶表達(dá)的組織分布及其體內(nèi)介導(dǎo)LoxP位點(diǎn)間重組的活性。結(jié)果顯示我們獲得了2個(gè)具有不同組織表達(dá)譜的Cre重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠。SP-A-Cre1轉(zhuǎn)基因小鼠的肺、腦和消化道組織中表達(dá)Cre重組酶,Cre表達(dá)的組織分布與前人報(bào)道的SP-A組織分布一致。SP-A-Cre2轉(zhuǎn)基因小鼠僅在肺組織中特異性表達(dá)Cre重組酶。將SP-A-Cre1轉(zhuǎn)基因小鼠與Smad4條件打靶小鼠(Smad4~(co/co))交配獲得了Smad4基因剔除小鼠。SP-A-Cre1;Smad4~(co/co)小鼠出生后2天開始出現(xiàn)體形矮小,頭顱發(fā)育異常,出生后5天死亡。 所有這些結(jié)果表明本研究研制的兩株SP-A-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠均在Ⅱ型肺上皮細(xì)胞中表達(dá)有活性的Cre重組酶。這些SP-A-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠是在Ⅱ型肺上皮細(xì)胞進(jìn)行條件基因剔除研究以及進(jìn)行SP-A表達(dá)細(xì)胞譜系分析的有力工具。
[Abstract]:Type 鈪，

本文編號(hào)：1361870