本文關(guān)鍵詞：SOCS1負(fù)性調(diào)節(jié)Kupffer細(xì)胞內(nèi)毒素信號傳導(dǎo)的研究　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：內(nèi)毒素(endotoxin, ET)又名脂多糖(lipopolysaccharide, LPS),是革蘭氏陰性(G-)細(xì)菌細(xì)胞壁上的主要成分。LPS 通過激活單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)(mononuclear phagocytic system, MPS)引起白細(xì)胞介素-1(IL-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、干擾素(IFN)等大量前炎性介質(zhì)釋放,引發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)及膿毒癥(sepsis)的發(fā)生,或引發(fā)多器官功能不全綜合癥(multipleorgan dysfunction syndrome, MODS) 甚至死亡。 然而,機(jī)體感染G-細(xì)菌后的臨床表現(xiàn)輕重不一,表明機(jī)體存在對LPS的耐受差異性,亦即LPS除了引起炎癥應(yīng)答外,還能誘導(dǎo)機(jī)體和細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)毒素耐受(endotoxin tolerance)。內(nèi)毒素耐受是細(xì)胞或機(jī)體經(jīng)過低劑量LPS刺激后,對更大劑量LPS的再次刺激呈低反應(yīng)性或無反應(yīng)的一種狀態(tài)。內(nèi)毒素耐受的機(jī)制比較復(fù)雜,目前尚不完全清楚,最近發(fā)現(xiàn),不單是G-細(xì)菌可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)毒素耐受,其它一些致炎物質(zhì)如某些細(xì)菌的菌毛蛋白(recombinant fimbrillin,rFimA)、阿拉伯甘露糖脂(lipoarabinomannan, LAM)、可溶性結(jié)核因子(soluble tuberculosisfactor,STF) 以及支原體巨噬細(xì)胞活化脂肽2(macrophage-activatinglipotides 2,MALP-2)等也可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)毒素耐受,有學(xué)者稱此為內(nèi)毒素的交叉耐受, 可見內(nèi)毒素的耐受性機(jī)制極其復(fù)雜。 膿毒癥一直是臨床治療中的一個難點(diǎn),其中一個重要的原因就是臨床抗生素的應(yīng)用,已知抗生素在殺滅細(xì)菌的同時也促使大量 LPS 從菌體釋放,從而延續(xù)了內(nèi)毒素在體內(nèi)的生物毒性作用。因此,如能充分了解內(nèi)毒素耐受的形成機(jī)制,并能適當(dāng)?shù)卣T導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)毒素耐受, 重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 4 或許可能對臨床 G-細(xì)菌引起的膿毒血癥的防治提供一定的理論依據(jù)。 最近發(fā)現(xiàn),在經(jīng)過 LPS 或 CpG-DNA 刺激的巨噬細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了一 種細(xì)胞因子命名為細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)的抑制因-1(suppressor of cytokine signaling-1,SOCS1),又名 STAT 誘導(dǎo)的 STAT 抑制因子 1 (STAT-induced STAT inhibitor-1, SSI-1)或 JAK 結(jié)合蛋白 1 (JAK binding protein-1, JAK-1)。SOCS1 是細(xì)胞信號傳導(dǎo)的一種負(fù)性調(diào)節(jié)因子,一些 細(xì)胞因子如 IFN-γ、IL-4、 IL-6 等均可誘導(dǎo) SOCS1 的產(chǎn)生,SOCS1 產(chǎn) 生后隨即可與 JAKs 結(jié)合,從而抑制 IFN-γ、IL-4、IL-6 等細(xì)胞因子刺 激所產(chǎn)生的 JAK-STAT 信號級聯(lián)反應(yīng)的過度激活,進(jìn)而抑制下游的信 號傳導(dǎo)。Starr 等研究發(fā)現(xiàn) SOCS1 基因敲出小鼠的各個臟器均呈現(xiàn)不同 程度的致命病理損害,如爆發(fā)性肝炎等,并在生后三周內(nèi)就死亡。而 在 SOCS1 和 IFN-γ 雙基因敲除的小鼠,卻沒有多臟器病理損害和過早 死亡的現(xiàn)象,表明 SOCS1 可能是體內(nèi) IFN-γ 的重要調(diào)節(jié)分子。因此, 推測 SOCS1 可能在內(nèi)毒素耐受的形成中發(fā)揮著重要的作用。SOCS 家 族已發(fā)現(xiàn)有8個成員,分別命名為 SOCS1-7 和 CIS,其中 SOCS1 的表 達(dá)較早,可能與內(nèi)毒素耐受形成的早期機(jī)制有關(guān)。臨床常見的嚴(yán)重創(chuàng) 傷、燒傷、感染、休克、外科大手術(shù),常導(dǎo)致腸道內(nèi)的 G-細(xì)菌過度增 殖,產(chǎn)生大量的內(nèi)毒素,加上此時腸壁通透性增高,因此經(jīng)門靜脈途 徑吸收入血的內(nèi)毒素增多,從而造成不同程度的腸源性內(nèi)毒素血癥 (intestinal endotoxemia, IETM)。肝臟是機(jī)體的重要解毒器官,腸源性感 染所致的內(nèi)毒素移位首先攻擊肝臟,可見,肝臟對內(nèi)毒素的清除機(jī)制 直接關(guān)系到整個機(jī)體對內(nèi)毒素的反應(yīng)。因此,闡明機(jī)體肝臟對內(nèi)毒素 的耐受機(jī)制對減輕內(nèi)毒素所致的爆發(fā)性肝炎等多臟器的病理損害顯得 尤為必要。 枯否細(xì)胞(Kupffer cells, KCs)是常駐肝血竇內(nèi)的巨噬細(xì)胞,占所 有組織固有巨噬細(xì)胞的80%以上,是MPS中最大的細(xì)胞群及典型代表。 重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 5 由于其特殊的器官分布性,Kupffer 細(xì)胞一方面是防御腸源性細(xì)菌及內(nèi) 毒素的一道重要防線;另一方面,由于數(shù)量龐大,Kupffer 細(xì)胞被內(nèi)毒 素激活后將釋放出大量前炎癥細(xì)胞因子和其它毒性介質(zhì),在膿毒癥及 多器官損害的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。 鑒于此,本研究立足肝臟,以 MPS 中最典型的 Kupffer 細(xì)胞和炎 性介質(zhì)中最典型的 LPS 為研究對象,通過建立內(nèi)毒素耐受的小鼠及 Kupffer 細(xì)胞模型,并采用體外 RNA 干擾技術(shù)(RNA interference,RNAi) 干擾小鼠腹腔巨噬細(xì)胞株 RAW264.7 細(xì)胞的 SOCS1 基因表達(dá)等策略, 利用 RT-PCR、ELISA 等現(xiàn)代分子生物學(xué)手段,并結(jié)合光鏡、電鏡、免 疫組化等方法,試圖闡明 SOCS1 在肝組織及 Kupffer 細(xì)胞中內(nèi)毒素耐 受形成機(jī)制中的作用,得出主要的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論如下: 1.實(shí)驗(yàn)動物以 5mg/kg 的 LPS(大腸桿菌 O111B4)腹腔注射建立 內(nèi)毒素血癥模型;并以 0.5mg/kg 的 LPS 誘導(dǎo)建立內(nèi)毒素耐受動物模 型。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在 LPS 注射后,肝組織中 SOCS1 mRNA、TNF-α mRNA 的表達(dá)快速增加,隨后又逐漸下降,但是,內(nèi)毒素耐受組(ETT)的 SOCS1 mRNA 表達(dá)較非耐受組(NETT)高,而 TNF-α mRNA 的表達(dá) 較 NETT 組低;血清中的 TNF-α 水平也呈先升高后下降,但 ETT 組的 TNF-α 水平較 NETT 組低;肝組織可見脂肪變性、壞死等病理改變, 超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)為 kupffer 細(xì)胞激活,吞噬功能增強(qiáng);免疫組織化學(xué)可見 肝組織中 SOCS1 的表達(dá)?
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1354760