本文關(guān)鍵詞：人不成熟樹突狀細(xì)胞體外擴增及低溫凍存的研究　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：在大面積深度燒傷患者的救治工作中,及時有效的創(chuàng)面覆蓋是治療的關(guān)鍵。同種異體皮膚移植為創(chuàng)面覆蓋提供了良好的思路。但目前臨床上移植后的排斥反應(yīng)嚴(yán)重影響了治療效果。免疫抑制劑可以延長異體皮的存活時間,但大劑量抗排斥藥物的應(yīng)用同時增加了患者感染的危險性。通過攜帶供者抗原的不成熟樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)異基因皮膚移植耐受為延長異體皮成活時間的有效途徑。 樹突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)是體內(nèi)功能最強的抗原遞呈細(xì)胞(antigen-presenting cell,APC),是天然免疫和獲得性免疫的重要調(diào)節(jié)劑。在樹突狀細(xì)胞的發(fā)育過程中,不成熟樹突狀細(xì)胞(immature dendritic cell,imDC)與成熟DC(mature dendritic cell,mDC)在表型特征以及生物學(xué)功能上都有區(qū)別。imDC由于其細(xì)胞表面缺乏MHC-Ⅱ類分子和共刺激分子,在免疫應(yīng)答過程中非但不能激活T細(xì)胞,反而能誘導(dǎo)抗原特異性T細(xì)胞無能或凋亡,在誘導(dǎo)抗原特異性免疫耐受中發(fā)揮了重要作用。imDC穩(wěn)定性差,在正常培養(yǎng)條件下難以長期保存,臨床上使用的異體皮都來自死后捐贈者,同時燒傷發(fā)生具有極大的偶然性,如何長期有效的保存攜帶供者抗原的不成熟樹突狀細(xì)胞并保持其不成熟特性成為問題的關(guān)鍵。本實驗研究臍血來源的不成熟樹突狀細(xì)胞低溫凍存前后所表現(xiàn)的生物特性,為不成熟樹突狀細(xì)胞的臨床應(yīng)用提供保存方法。 在本研究中,我們?nèi)⌒迈r臍血分離單個核細(xì)胞,在體外經(jīng)粒系—巨噬細(xì)胞系集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)誘導(dǎo)產(chǎn)生不成熟樹突狀細(xì)胞,加10%二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)/5%二甲基亞砜(DMSO)+6%羥乙基淀粉(hydroxyethyl starch,HES)作為保護(hù)劑,-80℃冰箱降溫,-196℃保存,35~40℃水浴復(fù)溫,獲得凍存不成熟樹突狀細(xì)胞。光鏡下觀察臺盼藍(lán)拒染回收率;電鏡下觀察細(xì)胞形態(tài);流式細(xì)胞儀檢測兩組細(xì)胞表面成熟標(biāo)志(CD80、CD83和CD86);混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mixed lymphocyte reaction,MLR)檢測兩組細(xì)胞刺激未致敏T淋巴細(xì)胞增殖能力。 主要結(jié)果: 1.培養(yǎng)細(xì)胞體積增大,表面可見毛刺樣不規(guī)則突起,電鏡下細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,表面粗糙,明顯可見突起及皺襞;細(xì)胞表型具有典型的DC特征(CD1a、CD14、CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表達(dá)率分別為62.49%,18.28%,12.46%,4.60%,11.51%,
[Abstract]:In the treatment of large area deep burn patients, timely and effective wound cover is the key to the treatment. Allograft skin graft provides a good way of thinking for wound cover. However, the repulsive reaction after transplantation has a serious effect on the therapeutic effect. Immunosuppressants can prolong the survival time of the skin allograft, but the use of large doses of anti rejection drugs also increases the risk of infection in patients. The induction of allogenic skin graft tolerance through immature dendritic cells with donor antigen is an effective way to prolong the survival time of the allogenic skin.
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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1 王強,彭毅志;小鼠骨髓未成熟樹突狀細(xì)胞體外擴增及鑒定[J];中華燒傷雜志;2003年06期

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本文編號：1342563