本文關(guān)鍵詞：施馬倫貝格病毒核衣殼蛋白單克隆抗體的制備及其特性分析

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【摘要】：目的制備施馬倫貝格病毒(SBV)核衣殼蛋白(N)的單克隆抗體(mAb)并分析其特性。方法將SBV N基因分別構(gòu)建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X載體中,在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達帶組氨酸標簽的融合蛋白His-SBV-N和帶麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)標簽的融合蛋白MBP-SBV-N,分別用鎳-次氮基三乙酸(Ni-NTA)樹脂和直鏈淀粉樹脂純化兩種蛋白;用純化的His-SBVN免疫BALB/c小鼠制備mAb,以MBP-SBV-N為包被抗原間接ELISA篩選分泌mAb的雜交瘤細胞和測定mAb效價,利用蛋白G瓊脂糖凝膠從腹水中純化mAb;應(yīng)用Western blot和間接免疫熒光分析mAb的反應(yīng)性和特異性。結(jié)果篩選并純化出1株抗SBV的mAb(命名為1F2),效價為1∶32 000,重鏈亞型為IgG2α,輕鏈為κ;1F2既能與重組SBV N蛋白發(fā)生反應(yīng),又能識別SBV,但與布尼亞病毒科內(nèi)親緣關(guān)系較近的沙門達病毒、道格拉斯病毒和赤羽病病毒的N蛋白存在交叉反應(yīng),而與裂谷熱病毒N蛋白無交叉反應(yīng)。結(jié)論成功制備了抗SBV核衣殼蛋白的mAb,為SBV的血清學(xué)檢測提供了工具。
【作者單位】： 中國檢驗檢疫科學(xué)研究院動物檢疫研究所;德國弗里德里希洛弗勒研究所;
【基金】：“十二五”國家科技支撐計劃課題(2013BAD12B01) 國家質(zhì)檢總局科技計劃項目(2013IK054) 中國檢驗檢疫科學(xué)研究院基本科研業(yè)務(wù)費專項資金(2012JK011)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 施馬倫貝格病是一種新發(fā)的蟲媒性動物傳染病[1-2]。2011年11月,德國弗里德里希洛弗勒研究所(Friedrich-Loeffler-Institut,FLI)的科研人員首次證實該病的病原體為一種新型布尼亞病毒,并根據(jù)病毒分離地名將其命名為施馬倫貝格病毒(Schmallenbergvirus,SBV)[1]。SBV主要感染綿

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 伍銀橋;吳本儼;王剛石;尤緯締;王衛(wèi)華;王孟薇;;抗人GCRG213單克隆抗體的制備與鑒定[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年01期

2 謝印良;馬莉;秦立;劉鵬;曹善楠;朱海燕;熊冬生;許元富;;抗人Flt-1單克隆抗體的制備和活性鑒定[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年05期

3 張永寧;吳紹強;劉建;仇松寅;林祥梅;;歐洲暴發(fā)施馬倫貝格病疫情及我國應(yīng)采取的對策[J];中國獸醫(yī)雜志;2012年04期

4 景宏麗;王靜波;曹歡;林祥梅;;病毒性出血性敗血癥病毒單克隆抗體的制備及其特性分析[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2013年04期

5 張永寧;吳紹強;呂繼洲;馮春燕;王彩霞;袁向芬;鄧俊花;林祥梅;Wernike Kerstin;;施馬倫貝格病毒核衣殼蛋白的原核表達、純化及多克隆抗體的制備[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2013年10期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張永寧;吳紹強;呂繼洲;馮春燕;王彩霞;袁向芬;鄧俊花;林祥梅;Wernike Kerstin;;施馬倫貝格病毒核衣殼蛋白的原核表達、純化及多克隆抗體的制備[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2013年10期

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 史成銀,王印庚,黃P",王清印;大菱鲆病毒性疾病研究進展[J];高技術(shù)通訊;2003年09期

2 許建明;張念之;蔣一男;張利峰;夏春;;Taqman MGB探針快速定量檢測VHSV方法的研究[J];高技術(shù)通訊;2010年02期

3 倪穗;余曉巍;王建平;雷愛瑩;曾地剛;吳雄飛;;應(yīng)用巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測魚類病毒性出血性敗血癥病毒(VHSV)[J];海洋與湖沼;2009年04期

4 馬驪,王小寧,張智清,曾革非,周小明,陳愛君;人血管內(nèi)皮生長因子受體Flt-l胞外配體結(jié)合域的篩選及其結(jié)構(gòu)分析(英文)[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2001年06期

5 伍銀橋,王孟薇,吳本儼,王剛石,尤緯締,王衛(wèi)華;兔抗胃癌相關(guān)蛋白GCRG213抗體的制備及鑒定[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2004年02期

6 郝貴杰;沈錦玉;曹錚;潘曉義;;抗哈維氏弧菌單克隆抗體雜交瘤細胞系的建立及其特性鑒定[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2007年09期

7 劉恒巖;康維明;;乙酰肝素酶和VEGF在結(jié)腸癌組織中的表達及其與腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2010年11期

8 蔡應(yīng)娛;李偉毅;;血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的生物活性及其在臨床中的應(yīng)用[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2010年11期

9 沈青春;王芳;韓明遠;覃青松;范學(xué)政;楊漢春;寧宜寶;;豬肺炎支原體P46基因的原核表達與間接ELISA方法的建立[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2012年03期

10 張昀;劉平;韋友傳;李恭賀;辛桂瑜;王麗霞;盧晟盛;張明;盧克煥;鄭喜邦;;山羊c-Myc原癌基因原核表達和多克隆抗體的制備[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2012年06期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李士澤;趙巧香;辛九慶;趙雅楠;尹位;楊煥民;計紅;;BALB/C鼠冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白的原核表達、純化及其單克隆抗體的制備[J];中國生物工程雜志;2010年03期

2 王健偉;王彥斌;常昭瑞;閆克夏;譚文杰;屈建國;夏寧邵;阮力;洪濤;;抗SARS-CoV N蛋白單克隆抗體的特異性及其識別抗原表位的初步鑒定[J];中國病毒學(xué)(英文版);2006年03期

3 張娟;余曉林;陳維賢;陶鵬;唐霓;黃愛龍;鄭建;;特異性SARS-CoV N蛋白單克隆抗體的制備及抗原表位初步分析[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2006年04期

4 王淑杰;徐敏;蔡雪輝;武佳斌;劉永剛;王洪峰;石文達;李麗琴;徐明明;榮福龍;;豬鏈球菌WC-SS7株GDH基因的表達及GDH蛋白單克隆抗體的制備[J];中國人獸共患病學(xué)報;2009年10期

5 張娟;余曉林;陳維賢;陶鵬;唐霓;黃愛龍;鄭建;;重組SARS-CoV核衣殼蛋白的表達純化及其單克隆抗體的制備鑒定[J];中國人獸共患病學(xué)報;2006年08期

6 王淑杰;蔡雪輝;劉永剛;吳國軍;劉狄，

本文編號：1291814