本文關(guān)鍵詞：豬巨細(xì)胞病毒TaqMan熒光定量PCR檢測的建立

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【摘要】：目的建立一種特異、靈敏、快速檢測豬巨細(xì)胞病毒的TaqMan熒光定量PCR方法。方法根據(jù)GenBank已登錄的豬巨細(xì)胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PCMV)DNA序列設(shè)計(jì)合成特異性引物對和TaqMan熒光探針,經(jīng)優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了豬巨細(xì)胞病毒的TaqMan熒光定量PCR檢測方法(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR),進(jìn)行了FQPCR檢測方法的敏感性、特異性和重復(fù)性試驗(yàn);對疑似PCMV感染臨床樣品進(jìn)行了應(yīng)用檢測,并與常規(guī)PCR方法進(jìn)行了比對;對FQ-PCR檢測結(jié)果為PCMV陽性豬的不同內(nèi)臟器官進(jìn)行病毒含量比較檢測。結(jié)果成功建立了PCMV的FQ-PCR方法,標(biāo)準(zhǔn)曲線的循環(huán)閾值(Ct值)與模板濃度有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.998;檢測靈敏度可達(dá)1拷貝/μL,是常規(guī)PCR的100倍;特異性高,對pGEM-T/PCMV重組質(zhì)粒擴(kuò)增呈現(xiàn)陽性反應(yīng)曲線,而對6個(gè)對照病原的擴(kuò)增曲線均呈現(xiàn)陰性反應(yīng);對不同濃度的pGEM-T/PCMV重組質(zhì)粒分別重復(fù)擴(kuò)增6次,重復(fù)結(jié)果良好;對15份臨床疑似PCMV感染的組織病料進(jìn)行應(yīng)用檢測表明,其中有9份樣品為陽性,與常規(guī)PCR方法檢測的陽性符合率為100%。豬的內(nèi)臟器管中PCMV含量最高為扁桃體,最低的為小腸。結(jié)論成功建立了PCMV FQ-PCR方法,可用于臨床上PCMV感染豬的確診和隱性感染豬的早期檢測,對PCMV的快速診斷、綜合防控及凈化等具有重要意義。
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;周口市畜禽改良站;河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心;鄭州市中心醫(yī)院消毒供應(yīng)中心;
【基金】：河南省科技創(chuàng)新人才計(jì)劃項(xiàng)目(No.2011-1)資助~~
【分類號】：R373
【正文快照】： 巨細(xì)胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)是一類在自然界普遍存在而又有嚴(yán)格種屬特異性的病毒,屬β皰疹病毒亞科,致豬發(fā)病的為豬巨細(xì)胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PCMV),是一種條件性傳染病。該病毒首次從英格蘭分離,是繼偽狂犬病毒之后發(fā)現(xiàn)的第2個(gè)豬皰疹病毒[1]�；钾i特征性臨診

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 劉紅亮;朱玲;徐志文;王燕群;魏浩澈;郭萬柱;趙玲;;豬巨細(xì)胞病毒PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年07期

2 閆若潛;安春霞;劉淑敏;趙雪麗;郭小玲;趙明軍;吳志明;;豬傳染性胃腸炎與流行性腹瀉病毒二重RT-PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J];中國畜牧獸醫(yī);2012年09期

3 宋志軍;宋長緒;楊增岐;朱道中;武占銀;蔣智勇;林志雄;劉燕玲;張福良;;豬生殖與呼吸綜合征病毒TaqMan熒光定量RT-PCR檢測方法的建立[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2006年02期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 烏娜爾汗·金斯汗;海拉提江·賽提汗;;PRRSV致病機(jī)制及其相關(guān)檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J];山東畜牧獸醫(yī);2010年03期

2 王劭;胡奇林;程曉霞;林鋒強(qiáng);歐陽歲東;朱小麗;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2006年S1期

3 郭楊;陳世界;郭萬柱;李t，

本文編號：1291581