本文關(guān)鍵詞：熒光素酶標(biāo)記的HBV細(xì)胞模型的建立

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【摘要】：建立螢火蟲熒光素酶(Fluc)為報(bào)告基因標(biāo)記的乙型肝炎病毒(HBV)體外感染的細(xì)胞模型。利用分子亞克隆技術(shù),以pAAV/1.2HBV質(zhì)粒為模板,PCR擴(kuò)增帶有反向重復(fù)序列(ITR)的1.2倍HBV基因組片段,反向插入真核表達(dá)載體pGL3-CP-Fluc中,構(gòu)建Fluc標(biāo)記的HBV基因組表達(dá)質(zhì)粒pGL3-CP-Fluc-HBV1.2,并將此質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至Huh-7細(xì)胞中。全自動免疫分析儀進(jìn)行HBsAg、HBeAg的定量檢測,生物發(fā)光檢測儀檢測Fluc其在細(xì)胞的表達(dá)水平。成功構(gòu)建了1.2倍HBV全基因真核表達(dá)載體,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Huh-7細(xì)胞后,質(zhì)粒在細(xì)胞中高水平表達(dá)Fluc,并可以正常分泌HBsAg、HlBeAg。重組質(zhì)粒pGL3-CP-Fluc-HBV1.2能在Huh-7細(xì)胞中表達(dá),其穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞可作為一種新型的HBV體外感染模型,為抗病毒藥物研究奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國人民解放軍第一七五醫(yī)院;廈門大學(xué)附屬東南醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81102223) 南軍軍區(qū)醫(yī)藥衛(wèi)生科研基金項(xiàng)目(12MA068)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的感染嚴(yán)重影響著人類的健康,它能夠引起急、慢性病毒性肝炎。急性感染后,有5%?10%的成年人發(fā)展為持續(xù)感染,最終可以導(dǎo)致慢性肝炎、肝硬化和肝癌。迄今為止,還無有效的藥物能夠完全治愈乙肝患者。由于HBV具有嚴(yán)格的宿主特異性,不能在體外

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本文編號：1291868