本文關(guān)鍵詞：體外斑點(diǎn)雜交篩選靶向多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌高效反義核酸序列實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的體外斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)?zāi)M體內(nèi)環(huán)境驗(yàn)證計(jì)算機(jī)輔助軟件設(shè)計(jì)的反義寡核苷酸序列的活性。方法采用計(jì)算機(jī)輔助軟件對(duì)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌生長(zhǎng)必須基因gyrA的mRNA進(jìn)行二級(jí)結(jié)構(gòu)分析計(jì)算,設(shè)計(jì)出10條反義寡核苷酸序列,合成探針與體外轉(zhuǎn)錄并用地高辛標(biāo)記的gyrA mRNA進(jìn)行斑點(diǎn)雜交,分別選擇一條雜交信號(hào)最強(qiáng)和一條雜交信號(hào)弱的探針序列合成連接穿膜肽序列的肽-肽核酸,以不同濃度的肽-肽核酸處理鮑曼不動(dòng)桿菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC19606和多重耐藥株,測(cè)定經(jīng)不同濃度PPNA處理的細(xì)菌光密度A600值并進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù),觀察其對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的抑制作用。以20μmol/L雜交信號(hào)強(qiáng)的肽-肽核酸作用于銅綠假單胞菌,測(cè)細(xì)菌光密度A600值,觀察其對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的抑制作用。結(jié)果雜交信號(hào)強(qiáng)的肽-肽核酸對(duì)多重耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌和ATCC19606均有明顯的體外抗菌活性,其最低抑菌濃度分別為5與10μmol/L,10μmol/L濃度時(shí)對(duì)兩種細(xì)菌均具有殺菌活性,而雜交信號(hào)弱的肽-肽核酸對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)無(wú)抑制作用,即使將其濃度增加到20μmol/L。雜交信號(hào)強(qiáng)的肽-肽核酸對(duì)銅綠假單胞菌無(wú)生長(zhǎng)抑制作用。結(jié)論體外斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蝌?yàn)證計(jì)算機(jī)軟件預(yù)測(cè)設(shè)計(jì)的具有特異性的反義核酸的活性,為體外可靠、快速、高通量篩選高效反義序列提供了一種有效的方法,并且為篩選所有基因高效反義序列搭建了一個(gè)平臺(tái)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科;重慶市中山醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81071400) 重慶市自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(CSTC2010BB5343) 國(guó)家臨床重點(diǎn)�？平ㄔO(shè)項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)資助([2010]305)
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： 鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacterbaumannii,Ab)廣泛分布于自然環(huán)境和醫(yī)院環(huán)境中,是最常見(jiàn)的條件致病菌之一。特別是在重癥監(jiān)護(hù)室(ICU),已成為一個(gè)重要的病原體[1]。近年來(lái)多重耐藥(multidrug-resistant,MDR)甚至泛耐藥(pan-resistant,PDR)鮑曼不動(dòng)桿菌的不斷出現(xiàn),并在全球多個(gè)國(guó)家

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本文編號(hào)：1180529