發(fā)布時間：2017-11-11 11:19

  本文關(guān)鍵詞：FXYD5基因真核表達載體的構(gòu)建及其功能的初步研究

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【摘要】：目的構(gòu)建大鼠離子通道相關(guān)蛋白(FXYD5)基因真核表達載體,研究其對大鼠胸主動脈平滑肌細胞(CRL-1444)的體外作用。方法以含F(xiàn)XYD5全長cDNA的pBluescriptⅡKS(+/-)載體為模板,并用PCR方法擴增,將其連接于真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1(+),PCR、雙酶切和測序鑒定后,用脂質(zhì)體包裹轉(zhuǎn)染大鼠胸主動脈細胞,轉(zhuǎn)染重組真核表達載體為實驗組(PF組),轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒PCDNA3.1(+)為陰性對照組(NC組)和未做處理的為空白對照組(BC組)。Real-time PCR定量檢測各組FXYD5的表達水平,并研究該基因?qū)RL-1444細胞膜鈉鉀泵(Na~+-K~+-ATPase)活性、細胞增殖能力、遷移力的影響。結(jié)果重組的真核表達載體pcDi4A3.1(+)-FXYD5構(gòu)建成功,PF組FXYD5的表達水平較BC組上調(diào)17.312倍(P0.05),PF組的細胞膜Na~+-K~+-ATPase活性高于BC組和NC組(均P0.05),細胞增殖能力和遷移力均高于NC組(均P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建了真核表達載體pcDNA3.1(+)-FXYD5,并在CRL-1444細胞中使FXYD5基因的表達水平增加,且增強CRL-1444細胞膜的Na~+-K~+-ATPase活性、細胞增殖和遷移能力。
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院ICU;溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科;杭州師范大學附屬醫(yī)院心內(nèi)科;
【基金】：衛(wèi)生部科學研究基金(wkj-2008-2-031)
【分類號】：R3416
【正文快照】： 近年的研究結(jié)果表明,高血壓病是一種遺傳易患性加環(huán)境誘導共同作用下導致的,特別是家族多 發(fā)性高血壓病患者具有很強的遺傳傾向[1],并且該類患者較無高血壓家族史的血壓正常高值血管內(nèi)皮損傷更明顯p]。FXYD蛋白家族最近被證明是一個組織特異性調(diào)節(jié)Na+-K+-ATPaSe的小跨膜蛋白p

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本文編號：1171181