本文關(guān)鍵詞：anoctamin 1在中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞中的表達(dá)及其離子通道特性

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【摘要】：目的:探討anoctamin 1在中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)中的表達(dá)情況,分析其離子通道特性,為研究鈣激活氯離子通道的生理功能提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:PCR方法獲得anoctamin 1編碼區(qū)基因,構(gòu)建pcDNA3.1-anoctamin 1真核表達(dá)載體。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染anoctamin 1至CHO中,抗生素篩選獲取穩(wěn)定表達(dá)anoctamin 1的CHO株。應(yīng)用RT-PCR技術(shù)和倒置熒光顯微鏡檢測(cè)anoctamin 1于CHO中的表達(dá)和分布情況。應(yīng)用鹵族元素敏感的黃色熒光蛋白雙突變體YFP-H148Q/I152L檢測(cè)anoctamin 1離子通道的功能。以加入calcimycin和高濃度碘離子的PBS緩沖液的為實(shí)驗(yàn)組,未加入calcimycin和高濃度碘離子的PBS緩沖液的為對(duì)照組。結(jié)果:限制性?xún)?nèi)切酶酶切后的瓊脂糖凝膠電泳和測(cè)序,目的基因anoctamin 1克隆至真核表達(dá)載體pcDNA3.1;RT-PCR和倒置熒光顯微鏡觀察,CHO在mRNA和蛋白水平表達(dá)anoctamin 1,且anoctamin 1蛋白主要表達(dá)于CHO膜上;熒光淬滅動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn),CHO表達(dá)的anoctamin 1具有轉(zhuǎn)運(yùn)碘離子的作用,且實(shí)驗(yàn)組碘離子轉(zhuǎn)運(yùn)速度顯著高于對(duì)照組(P0.05)。結(jié)論:anoctamin 1可高效表達(dá)于CHO膜;CHO表達(dá)的anoctamin 1具有經(jīng)典鈣激活氯離子通道特性。
【作者單位】： 吉林醫(yī)藥學(xué)院生物化學(xué)檢驗(yàn)教研室;吉林醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心;吉林醫(yī)藥學(xué)院病原教研室;
【基金】：吉林省教育廳科研基金資助課題(2013-351) 吉林省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃資助課題(2013,2014) 吉林醫(yī)藥學(xué)院大學(xué)生科研基金資助課題(吉醫(yī)學(xué)科字[2012]第12號(hào))
【分類(lèi)號(hào)】：R363
【正文快照】： anoctamin 1是最近發(fā)現(xiàn)的在哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜上廣泛表達(dá)的一類(lèi)陰離子通道,因其主要激活方式是通過(guò)胞漿中游離鈣離子,故也稱(chēng)之為鈣激活氯離子通道。細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高時(shí),某些特定的生物活性物質(zhì)與細(xì)胞膜上的G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合,通過(guò)一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)促使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中鈣離子釋放,進(jìn)而

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