本文關(guān)鍵詞：持續(xù)Wnt信號(hào)通路激活促進(jìn)胚胎干細(xì)胞源造血干細(xì)胞的增殖

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【摘要】：背景:如何提高胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)效率、促進(jìn)胚胎干細(xì)胞源造血干細(xì)胞體外增殖成為目前急需解決的課題。目的:以外源性Wnt3a作為誘導(dǎo)劑,激活培養(yǎng)中的小鼠胚胎干細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)通路,觀察該通路的激活是否促進(jìn)胚胎干細(xì)胞向造血祖細(xì)胞的定向分化。方法:用外源性wnt3a(100μg/L)持續(xù)作用ES-E14TG2a小鼠胚胎干細(xì)胞21 d,通過(guò)細(xì)胞免疫熒光及蛋白免疫印跡檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)β-catenin蛋白含量,QRT-PCR檢測(cè)Wnt下游靶標(biāo)基因的表達(dá)量來(lái)確定經(jīng)典Wnt/β-catenin信號(hào)通路是否被激活,然后采用單層貼壁培養(yǎng)法誘導(dǎo)其向造血干細(xì)胞分化,流式細(xì)胞儀檢測(cè)造血發(fā)育相關(guān)表面標(biāo)志CD34+/Sca-1+,同時(shí)以QRT-PCR法檢測(cè)造血相關(guān)基因的表達(dá)情況。結(jié)果與結(jié)論:ES-E14TG2a小鼠胚胎干細(xì)胞經(jīng)wnt3a(100μg/L)連續(xù)培養(yǎng)21 d后發(fā)現(xiàn)β-catenin蛋白在細(xì)胞內(nèi)積累;Wnt信號(hào)通路的下游靶標(biāo)基因Pitx2、Frizzled、Sox17、Oct4的表達(dá)量均出現(xiàn)不同程度的增加,可見(jiàn)經(jīng)典Wnt/β-catenin信號(hào)通路有被激活;單層貼壁培養(yǎng)法誘導(dǎo)其向造血干細(xì)胞分化的過(guò)程中檢測(cè)到CD34+/Sca-1+細(xì)胞含量在14 d時(shí)占總細(xì)胞量高達(dá)20.2%,而對(duì)照組的僅占11.9%。造血相關(guān)基因骨形態(tài)發(fā)生蛋白4、FLK2及CD34的表達(dá)量均增加,而Smad5的表達(dá)則明顯受到抑制。說(shuō)明Wnt3a持續(xù)作用可激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路,并促進(jìn)ES-E14TG2a小鼠胚胎干細(xì)胞向造血干細(xì)胞的定向分化。
【作者單位】： 福州大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院;福建省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院 福建省醫(yī)學(xué)測(cè)試重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 干細(xì)胞 胚胎干細(xì)胞 造血干細(xì)胞 Wnta Wnt/β-catenin信號(hào)通路 福建省自然科學(xué)基金
【基金】：福建省自然科學(xué)基金(2012J01325) 福建省醫(yī)學(xué)創(chuàng)新課題(2012-cx-13) 福建省省屬公益類科研院所基本科研專項(xiàng)(2010R1034-1)~~
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 0引言Introduction多能性的胚胎干細(xì)胞可以分化成體內(nèi)三個(gè)胚層的所有細(xì)胞類型[1],是臨床再生治療的理想細(xì)胞來(lái)源,胚胎干細(xì)胞的這一特性使它成為令人感興趣的一個(gè)研究課題。各種不同技術(shù)已被用于促進(jìn)造血分化,比如細(xì)胞共培養(yǎng)或添加各種造血誘導(dǎo)劑及細(xì)胞因子。胚胎干細(xì)胞的體外

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6 印惠s，

本文編號(hào)：1061138